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Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract] Genetically encoded biosensors are powerful tools for quantitative visualization of ions and metabolites in vivo. Design and optimization of such biosensors typically require analyses of large numbers of variants. Sensor properties determined in vitro such as substrate specificity, affinity, response range, dynamic range, and signal-to-noise ratio are important for evaluating in vivo data. This protocol provides a robust methodology for in vitro binding assays of newly designed sensors. Here we present a detailed protocol for purification and in vitro characterization of genetically encoded sensors, exemplified for the His affinity-tagged GO-(Green-Orange) MatryoshCaMP6s calcium sensor. GO-Matryoshka sensors are based on single-step insertion ...
[摘要] [摘要]遗传编码的生物传感器是强大的工具为离子和代谢物的定量可视化在体内。设计和优化此类生物传感器通常需要分析大量变体。体外确定的传感器特性，例如底物特异性，亲和力，响应范围，动态范围和信噪比，对于评估体内数据很重要。该协议为新设计的传感器的体外结合测定提供了可靠的方法。这里我们提出了一个详细的协议用于纯化和体外表征的遗传编码的传感器，例示的His亲和标记的GO-（绿橙色）MatryoshCaMP6s钙传感器。GO-Matryoshka传感器基于在感兴趣的结合蛋白内一步插入一个包含两个嵌套荧光蛋白，圆形排列的荧光绿色FP（cpGFP ）和Large Stoke Shift LSSmOrange的盒的方法，从而产生了利用被分析物触发的比例式传感器cpGFP的荧光变化。
[背景技术]将绿色荧光蛋白（GFP）在1962年被鉴定在水母水母维多利亚（下村等人，1962） 。30年后，描述了其首次用作报道基因（Chalfie等，1994）。自从发现以来，GFP变体和其他荧光蛋白为生物科学的主要进步做出了巨大贡献，并且现在已成为生物医学研究中的常用工具（Frommer等，2009）。
各种荧光蛋白（FP）和FP变异体已被用作报道分子或与所有生命王国的生物体中的蛋白融合（Chudakov等，2010 ；Valeur和Berberan- ...
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] Exosomes, a subtype of extracellular vesicles, are nanovesicles of endocytic origin. Exosomes contain a plethora of proteins, lipids, and genetic materials of parent cells to facilitate intercellular communications. Tracking exosomes in vivo is fundamentally important to understand their biodistribution pattern and the mechanism of biological actions in experimental models. Until now, a number of tracking protocols have been developed, including fluorescence labeling, bioluminescence imaging, magnetic resonance imaging, and computed tomography (CT) tracking of exosomes. Recently, we have shown the tracking and quantification of exosomes in a spinal cord injury model, by using two tracking approaches. More specifically, following intranasal administration of gold ...
[摘要] [摘要 ] 外泌体是细胞内囊泡的一种亚型，是内吞起源的纳米囊泡。外泌体含有过多的蛋白质，脂质和亲代细胞的遗传物质，可促进细胞间的通讯。在体内追踪外泌体对于了解其生物分布模式和分子结构至关重要。迄今为止，已经开发出了许多跟踪方案，包括荧光标记，生物发光成像，磁共振成像以及外泌体的计算机断层扫描（CT）跟踪。通过两种追踪方法对脊髓损伤模型中的外泌体进行定量分析。更具体地说，在将金纳米颗粒包裹的外泌体鼻内给药于完全脊髓损伤的大鼠后，使用microCT 追踪整个中枢神经系统的外泌体，并通过使用电感耦合等离子体和fla定量 另外，进行了荧光标记的外泌体的光学成像，以了解与健康对照相比，在脊髓病变中迁移的外泌体的丰度，并进一步检查它们对病变中不同细胞类型的亲和力。因此，本文提出的方案有助于研究脊髓损伤情况下细胞和器官水平上的外泌体生物分布。该协议还将使研究人员能够在其他感兴趣的模型中更好地阐明外来体的命运。
[背景 ]外泌体是内体来源的天然纳米囊泡（直径为30-150 nm），由间充质干细胞（MSCs）等多种细胞分泌（Yang 等，2018）。外泌体携带蛋白质，脂质和遗传物质。亲本细胞，并且能够对邻近或远端的细胞和组织产生多种生物学效应（Valadi 等，2007；van Niel ...
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