| Stable Transformation of Arabidopsis thaliana Cell Suspension Cultures: A Case Study for the Overexpression of The COI1 Receptor
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Cell suspension cultures have been studied for decades to produce natural molecules. However, the difficulty in generating stably transformed cell lines has limited their use to produce high value chemicals reproducibly and in elevated quantities.
In this protocol, a method to stably transform and maintain Arabidopsis cell suspension cultures is devised and presented in detail. Arabidopsis cell cultures were directly transformed with A. tumefaciens for the overexpression of the CORONATINE INSENSITIVE 1 (COI1) jasmonate receptor. Cell cultures were established after transformation and continuously maintained and tested for the overexpression of COI1. The protocol was also previously used to silence Arabidopsis peroxidases and allows for long ...
[摘要] [摘要]细胞悬浮培养已经研究了数十年，以生产天然分子。然而，产生稳定转化的细胞系的困难限制了它们用于可再现地和高产量地生产高价值化学品的用途。
在该协议中，设计并详细介绍了稳定转化和维持拟南芥细胞悬浮培养物的方法。直接用根癌农杆菌转化拟南芥细胞培养物，以过量表达可乐宁不敏感1（COI1）茉莉酸酯受体。转化后建立细胞培养物，并连续保持并测试COI1的过表达。该协议以前也曾用于沉默拟南芥过氧化物酶，并允许长期维持转化细胞。提供了在液体和固体培养基中培养维持的详细信息，以及蛋白质表达的证据来证实转化。
所描述的系统为合成生物学研究独立于发育控制的信号传递并获得生物技术和医学领域感兴趣的代谢物提供了强大的工具。
[背景]植物细胞悬浮培养为植物次生代谢产物的生产和去分化组织的研究提供了可行的替代方法（Wu和Ge，2004； Lee等，2010）。数十年来，人们对它们的使用兴趣不断提高，因为它们可以为人类使用的高价值生物技术产品提供连续生产系统。有各种各样的细胞培养物可产生大量具有商业和工业意义的次级代谢产物，例如花青素，甜菜碱，调味剂，甜菊苷等（Rao和Ravishankar，2002）。
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| Generation and in Planta Functional Analysis of Potato Virus Y mutants
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Potato virus Y (PVY), the type member of the genus Potyvirus (family Potyviridae), is the most widespread virus affecting potato and is included in the top five most economically detrimental plant viruses. Recently, the structure of the PVY virion has been determined by cryo-electron microscopy, which has opened the doors to functional studies that explore the involvement of selected amino acids in different stages of the viral cycle. The only way to functionally challenge in planta the role of particular amino acids in the coat protein of PVY, or in other viral proteins, is by using cDNA clones. The use and manipulation of PVY cDNA clones, unlike those of other potyviruses, has been traditionally impaired by the toxicity that certain sequences within the PVY ...
[摘要] [摘要] 马铃薯Y病毒（PVY）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus，Potyvirus，Potyvirus科）的模式成员，是危害马铃薯最广泛的病毒之一，被列为最具经济危害性的五大植物病毒之一。最近，低温电子显微镜技术已经确定了PVY病毒离子的结构，这为功能性研究打开了大门，可以探索在病毒周期的不同阶段中所选择的氨基酸的参与。唯一能在植物体内挑战PVY外壳蛋白或其它病毒蛋白中特定氨基酸的作用的方法是使用cDNA克隆。与其他马铃薯Y病毒不同，PVY cDNA克隆的使用和操作一直受到PVY基因组中某些序列对大肠杆菌的毒性的影响。在这里，我们描述了一个已发表的PVY cDNA克隆，它含有克服上述毒性的内含子，以探索不同外壳蛋白修饰对病毒感染的影响。该方案包括在大肠杆菌中操作cDNA克隆，用构建的克隆对植物进行生物接种，观察对植物的生物学效应，通过逆转录定量PCR对cDNA克隆进行定量，并通过透射电镜证实病毒离子的形成。未来的可能性包括使用荧光蛋白报告者标记的PVY cDNA克隆，以进一步深入了解外壳蛋白突变对PVY病毒离子细胞间运动的影响。
[背景] ...
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| Barley Transformation by Particle Bombardment Using Callus
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] The delivery of desired construct into plant cells relies mainly on Agrobacterium-mediated transformation. However, Agrobacterium transformation is still very challenging for barley as only one genotype is amendable to Agrobacterium infection. The demand for developing genotype independent transformation methods is thus high. Here we report a transformation protocol for barley cultivar “Rika” by particle bombardment.
[摘要] [摘要 ] 所需构建体向植物细胞的传递主要依靠农杆菌介导的转化。然而，大麦农杆菌转化仍然具有很大的挑战性，因为只有一种基因型可以改变农杆菌感染，因此对基因型独立转化方法的开发提出了很高的要求。在这里，我们报告了通过粒子轰击对大麦品种“ Rika”的转化方案。
[背景 ] 基于组织培养农杆菌转化通常用于导入的载体DNA导入植物细胞，但它往往是基因型的高效转化方案的dependent.The可用性因此是用于基因组编辑的经由成功至关重要农杆菌transformation.Barley是的一个不幸的是，在经济上很重要的谷物作物上，农杆菌转化原则上仅适用于“金承诺”品种，因此需要开发替代转化方法以通过作物基因组编辑促进遗传改良。 ，这可能是大麦的另一种转化方法。在这里，我们报道了使用愈伤组织根据小麦粒子轰击对大麦转化进行粒子轰击的方案（Tian 等人，2019）。
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