| Bioorthogonal Labeling and Chemoselective Functionalization of Lung Extracellular Matrix
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Decellularized extracellular matrix (ECM) biomaterials derived from native tissues and organs are widely used for tissue engineering and wound repair. To boost their regenerative potential, ECM biomaterials can be functionalized via the immobilization of bioactive molecules. To enable ECM functionalization in a chemoselective manner, we have recently reported an effective approach for labeling native organ ECM with the click chemistry-reactive azide ligand via physiologic post-translational glycosylation. Here, using the rat lung as a model, we provide a detailed protocol for in vivo and ex vivo metabolic azide labeling of the native organ ECM using N-Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated (Ac4GalNAz), together with procedures for decellularization and labeling characterization. Our ...
[摘要] [摘要]源自天然组织和器官的脱细胞细胞外基质（ECM）生物材料被广泛用于组织工程和伤口修复。为了增强其再生潜力，可以通过固定生物活性分子来使ECM生物材料功能化。为了使ECM以化学选择性的方式实现功能化，我们最近报告了一种有效的方法，可通过生理学上的翻译后糖基化，用点击化学反应的叠氮化物配体标记天然器官ECM 。在此，使用大鼠肺为模型，我们提供一种用于详细方案在体内和离体代谢叠氮化物使用N- Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated天然器官ECM的标记（AC 4GalNAz），以及用于脱细胞和标记表征的程序。我们的方法可以在体内三天内或离体器官培养期间的一天之内进行特异性而稳定的ECM标记。脱细胞后，所得的ECM标记保持稳定。通过我们的方法，ECM生物材料可以用所需的炔烃修饰的生物分子（例如生长因子和糖胺聚糖）进行功能化，以用于组织工程和再生应用。
关键字：细胞外基质，脱细胞，生物正交，化学选择性功能化，点击化学，肺
[背景]细胞外基质（ECM）是由特定组织或器官的非细胞成分组成的水合网络支架，在通过其所包含的生物活性成分（例如纤维蛋白，生长）支持住宅细胞的活动中起关键作用。因子和糖胺聚糖（GAG）（Theocharis et ...
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| Mouse Adipose Tissue Protein Extraction
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] As obesity becomes a global epidemic, the metabolism research field is increasingly focusing on studying the physiological and pathological roles of adipose tissues (AT). However, extracting proteins from AT is challenging due to abundant fat content of intracellular lipid droplets. Several commercial kits for extraction of AT proteins are available, as are protocols (such as the RELi protocol as well as other protein precipitation protocols). The protocols have been introduced to improve the quality and yield of extractions, but these methods either increase the cost or involve multiple steps. Herein, we describe a detailed protocol for mouse AT protein extractions based on our daily laboratory practice. This protocol requires only very common reagents and instruments, and can be ...
[摘要] [摘要 ] 随着肥胖成为全球性流行病，新陈代谢研究领域越来越集中于研究脂肪组织（AT）的生理和病理作用。然而，由于细胞内脂质滴中脂肪含量丰富，从AT中提取蛋白质具有挑战性。可提供用于提取AT蛋白的商业试剂盒，以及方案（例如RELi 该协议已被引入以提高提取的质量和产量，但是这些方法要么增加了成本，要么涉及多个步骤。在此，我们描述了一种基于小鼠AT蛋白提取的详细协议我们的日常实验室操作。该方案仅需非常通用的试剂和仪器即可完成，可在90-120分钟内完成并提供良好的总蛋白质含量回收率。因此，该方案是一种经济诱人，省时且高效的提取方法。来自AT的蛋白质。
[背景 ] 研究脂肪组织（AT）以解决与肥胖症病理生理学相关的问题通常涉及分析AT蛋白质。然而，AT蛋白质样品中的脂质污染严重影响蛋白质定量的准确性，蛋白质印迹图像的质量以及样品处理下游应用对。为了最大限度地减少脂质污染，商业试剂盒已被开发，如分TM 总蛋白提取试剂盒对脂肪组织/脂肪细胞培养S（发明生物技术公司，2017年）。中号矿全面协议的目标是减少脂肪含量，如过量的脂质（的去除RELI ）协议（迪亚兹马林等人，2019）和三氯乙酸（TCA）为基础的蛋白质沉淀法（Benbdelkamel 等人，2018）。尽管提高提取质量已经证实利用在上述过程中，这些方法的缺点也很明显：利用可商购的试剂盒 ...
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