| Ex vivo Assessment of Mitochondrial Function in Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using XF Analyzer
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Author:
Date:
2021-04-05
[Abstract] Cellular health and function, as we know today, depend on a large extent on mitochondrial function. The essential function of mitochondria is the energy production, more precisely ATP production, via oxidative phosphorylation. Mitochondrial energy production parameters therefore represent important biomarkers. Studies on human cells have mainly been performed on in vitro cell cultures. However, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are particularly suitable for such examinations. That’s why this protocol describes a method to measure key parameters of mitochondrial function in freshly isolated PBMCs with the latest technology, the XF Analyzer. For this ex vivo approach PBMCs are first isolated out of human anticoagulated blood. Next, they are attached to the surface of special ...
[摘要] [摘要]正如我们今天所知，细胞的健康和功能在很大程度上取决于线粒体的功能。线粒体的基本功能是ENER GY生产，更精确的LY ATP生产，通过氧化磷酸化。因此，线粒体能量产生参数代表重要的生物标记。对人类细胞的研究主要是在体外细胞培养中进行的。然而，外周血单核细胞（PBMC）是特别升ý适于这样的检查。这就是为什么这个协议描述测量与最新的技术，新鲜分离的PBMC线粒体功能的关键参数的方法的XF分析。对于这个离体PBMC首先是从人抗凝血液中分离出来的。接下来，将它们附着到预先涂有Poly-D-Lysine的特殊微孔板的表面上。期间的氧消耗速率（OCR）以及细胞外酸化率（ECAR）的应力试剂寡，羰氰化物随后的测量4 - （三氟甲氧基）苯腙（FCCP），鱼藤酮和抗霉素A被注入。可以从获得的结果中计算出几个线粒体参数。该协议的应用允许分析对人体细胞的各种影响，例如药物或环境因素。
[背景]线粒体在维持正常细胞功能中起关键作用。现在众所周知，它们不仅通过氧化磷酸化产生ATP，而且还参与氨基酸，脂质和核苷酸的代谢，潜水信号转导和氧化还原过程以及质量控制和降解过程，包括线粒体和磷酸化。细胞凋亡（Pfanner等，2019）。然而，线粒体代表正常细胞中ATP合成的主要位点（Akbari等人，2019）。为此，通过多亚基酶复合物I – ...
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| Pancreatic Acinar Cell Preparation for Oxygen Consumption and Lactate Production Analysis
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Mitochondrial dysfunction is a principal feature of acute pancreatitis (AP) although the underlying mechanisms are still unclear. AP precipitants induce Ca2+-dependent formation of the mitochondrial permeability transition pore (MPTP) in pancreatic acinar cells (PACs), leading to ATP depletion and necrosis. Evaluations of mitochondrial bioenergetics have mainly been performed in isolated PACs using confocal microscopy, with assessment of mitochondrial membrane potential, NADH/FAD+ and ATP levels, coupled with patch-clamp electrophysiology. These studies are technically demanding and time-consuming. Application of Seahorse flux analysis now allows detailed investigations of bioenergetics changes to be performed in cell populations using a multi-well plate-reader ...
[摘要] [摘要 ] 线粒体功能障碍是急性胰腺炎（AP）的主要特征，尽管其潜在机制尚不清楚。AP沉淀剂诱导胰腺腺泡细胞（PACs）中线粒体通透性过渡孔（MPTP）的Ca 2+ 依赖性形成，导致ATP耗竭和坏死。线粒体生物能学的评估主要使用共聚焦显微镜在分离的PAC中进行，评估线粒体膜电位，NADH / FAD + 和ATP水平，以及膜片钳电生理学。这些研究在技术上既费时又费力。应用范围 海马通量分析现在允许使用多孔平板阅读器格式对细胞群体中的生物能学变化进行详细研究；耗氧率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）分别提供有关细胞呼吸和糖酵解的重要信息。诸如最大呼吸，ATP关联容量和质子泄漏等参数可以通过应用呼吸功能“压力”测试得出，该测试涉及电子传输链的药理处理。因此，使用Seahorse Flux分析提供了一种快速，方便的方法来测量详细的细胞生物能学，并使结果与其他基于平板读取器的测定法结合使用，从而更全面地了解线粒体生物能学改变的病理生理后果。
[背景 ] 线粒体功能障碍是急性胰腺炎（AP）的核心特征，急性胰腺炎是一种使人衰弱且可能致命的疾病，目前尚无针对性的治疗方法（Criddle，2016； Habtezion ...
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