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Date:
2020-05-20
[Abstract] It is important to experimentally determine how membrane proteins are integrated into biomembranes to unveil the roles of the integration factors, and to understand the functions and structures of membrane proteins. We have developed a reconstitution system for membrane protein integration in E. coli using purified factors, in which the integration reaction in vivo is highly reproducible. This system enabled not only analysis of membrane-embedded factors including glycolipid MPIase, but also elucidation of the detailed mechanisms underlying membrane protein integration. Using the system, the integration of membrane proteins can be evaluated in vitro through a protease-protection assay. We report here how to prepare (proteo)liposomes and to determine the ...
[摘要] [摘要 ] 实验确定膜蛋白如何整合到生物膜中以揭示整合因子的作用，并了解膜蛋白的功能和结构非常重要。我们已经开发了一种重组系统，用于使用纯化因子在大肠杆菌中整合膜蛋白，其中体内的整合反应可高度重现。该系统不仅能够分析包括糖脂MPIase在内的膜嵌入因子，而且能够阐明膜蛋白整合背后的详细机制。使用该系统，可以在体外评估膜蛋白的整合 通过蛋白酶保护测定。我们在这里报告了如何准备（PROTEO ）脂质体，并确定膜蛋白结合的活动。
[背景技术 [ 0002 ] 在胞质溶胶中合成的膜蛋白和分泌蛋白分别被整合到生物膜中并跨生物膜转运，以定位在它们的目的地并表达其功能。细胞拥有将膜蛋白整合到生物膜中并使其分泌的蛋白跨生物膜的系统，这些蛋白通常从细菌到高级真核生物都是保守的。
在一种模式生物大肠杆菌中，通过遗传方法鉴定了一些整合因子，这些因子包括SloSecYEG （Newitt和Bernstein，1998），信号识别颗粒（SRP）及其受体SR （Ulbrandt 等，1997）。，和膜蛋白插入酶/分子伴侣YidC （Samuelson et al。，2000）。这些基因研究得到了生化方法的补充。使用体外系统对膜蛋白整合的分子机制进行了广泛的研究，其中蛋白质整合反应在试管中进行。
倒膜囊泡（INV）可通过用French ...
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