| Isolation of Murine Primary Aortic Smooth Muscle Cells
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Vascular smooth muscle cells (VSMCs) have been cultured for decades to study the role of these cells in cardiovascular disorders. The most common source of VSMCs is the rat aorta. Here we show the adaptation of this method to isolate and culture mouse aortic VSMCs. The advantage of this method is that there are many more transgenic mouse lines available compared to rats. The protocol consists of the isolation of the aorta, the liberation of vascular cells by the action of collagenase, culturing of VSCMs, and analyzing filamentous actin and alpha smooth muscle actin by fluorescence microscopy. VSCMs can be further used to study mechanisms underlying cardiovascular diseases.
Graphic abstract
Figure 1. Working steps ...
[摘要] [摘要]血管平滑肌细胞（VSMC）已培养了数十年，以研究这些细胞在心血管疾病中的作用。VSMC的最常见来源是大鼠主动脉。在这里，我们展示了此方法对分离和培养小鼠主动脉VSMC的适应性。这种方法的优点是，与大鼠相比，有更多的转基因小鼠系可用。该方案包括主动脉的分离，通过胶原酶的作用释放血管细胞，培养VSCM ，通过荧光显微镜分析丝状肌动蛋白和α平滑肌肌动蛋白。VSCM可进一步用于研究心血管疾病的潜在机制。
图形摘要：
˚F igure 1.工作步骤
关键词：血管平滑肌细胞鼠主动脉提取分离培养
[背景]血管壁细胞（壁细胞）在多种疾病的调节中起着至关重要的作用，从高血压（Rodríguez-Vita等，2005a）和动脉粥样硬化（Rodríguez-Vita等，2008）到癌症（ Wong等人，2020年），甚至最近还有COVID-19 （He等人，2020年）。毛细血管大部分被周细胞覆盖，而较大的血管在血管壁中含有VSCM。壁细胞通过血管收缩和血管舒张来控制血流。这样，吨哎是在几种药物靶，其降低血压（圣保罗等人，2020） ...
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| Modeling NOTCH1 driven T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in Mice
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressive hematological malignancy that arises from transformation of T-cell primed hematopoietic progenitors. Although T-ALL is a heterogenous and molecularly complex disease, more than 65% of T-ALL patients carry activating mutations in the NOTCH1 gene. The majority of T-ALL–associated NOTCH1 mutations either disrupt the negative regulatory region, allowing signal activation in the absence of ligand binding, or result in truncation of the C-terminal PEST domain involved in the termination of NOTCH1 signaling by proteasomal degradation. To date, retroviral transduction models have relied heavily on the overexpression of aggressively truncated variants of NOTCH1 (such as ICN1 or ΔE-NOTCH1), which result in ...
[摘要] [摘要 ] T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）是一种侵袭性血液恶性肿瘤，其起源于T细胞引发的造血祖细胞的转化。尽管T-ALL是一种异质且分子复杂的疾病，但超过65％的T-ALL患者在NOTCH1 基因中带有激活突变。大多数与T-ALL相关的NOTCH1 突变要么破坏负调控区，允许在没有配体结合的情况下激活信号，要么导致蛋白酶体降解终止NOTCH1信号终止所涉及的C末端PEST域被截短。迄今为止，逆转录病毒转导模型在很大程度上依赖于侵袭性截短的变种的过度表达。 NOTCH1 （例如ICN1或ΔE-NOTCH1）可导致信号传导的超生理水平，并且在人类T-ALL中很少见。当前方案描述了小鼠骨髓分离，造血干细胞和祖细胞（HSC）富集，然后逆转录病毒转导的致癌突变体形式的NOTCH1受体（NOTCH1-L1601P-ΔP）的方法，该方法与获功能突变最常见于患者样品中。组成型活性NOTCH1的这种强制表达的标志是胸腺外未成熟T细胞发育的瞬时波，此波在致癌性转化为T-ALL之前。此外，该方法通过允许白血病细胞与微环境之间的串扰来模拟体内白血病的转化和进展，这是基于细胞系的体外研究无法解释的一个方面。因此，HSC转导和移植模型更真实地概括了人类疾病的发展，为进一步的体内和离体功能研究提供了高度全面和通用的工具。
[背景 ] ...
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