| Permethylation and Microfractionation of Sulfated Glycans for MS Analysis
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Sulfated glycans are barely detectable in routine mass spectrometry (MS)-based glycomic analysis due to ion suppression by the significantly more abundant neutral glycans in the positive ion mode, and sialylated non-sulfated glycans in the negative ion mode, respectively. Nevertheless, the negative charge imparted by sulfate can be advantageous for selective detection in the negative ion mode if the sialic acids can first be neutralized. This is most conveniently achieved by a concerted sample preparation workflow in which permethylation is followed by solid phase fractionation to isolate the sulfated glycans prior to MS analysis. Importantly, we demonstrated that conventional NaOH/DMSO slurry permethylation method can retain the sulfates. Instead of extracting permethylated glycans into ...
[摘要] [摘要 ] 硫酸化的聚糖是勉强detecta 常规质谱（MS）为基础的BLE glycomic 分析，由于通过在显著更丰富中性聚糖离子抑制了正离子模式，和唾液酸化的非硫酸化的聚糖中的negat 香港专业教育学院离子模式，分别。然而，如果可以首先中和唾液酸，则硫酸盐赋予的负电荷可能有利于以负离子模式进行选择性检测。这可以通过一致的样品制备流程最方便地实现，在该流程中，进行甲基化后，进行甲基化，然后进行固相分级分离以分离硫酸化的聚糖。重要的是，我们证明了传统的NaOH / DMSO浆料过甲基化方法可以保留硫酸盐。代替将全甲基化聚糖提取到氯仿中进行样品净化，可将反相C18柱与自装胺尖或混合模式弱阴离子交换柱结合使用，以高收率获得未硫酸化，单硫酸化和将硫酸化的全甲基化聚糖分别分散在不同的部分中，以进行糖酵解分析。
[背景 ] 带有磺基唾液酸基LeX 糖基的硫酸化甘氨酸罐是L-选择素的配体，参与生理和炎症状态的淋巴细胞归巢（Rosen ，2004；Kawashima ，2006）。许多聚糖阵列研究还表明，硫酸化糖苷是几种半乳糖凝集素（Ideo 等，2002）和Siglecs （Bochner ...
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| Negative Ion Mode nanoLC-ESI-MS/MS Analyses of Permethylated Sulfated Glycans
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] We have developed enabling techniques for sulfoglycomics based on MALDI-MS mapping and MS/MS sequencing of permethylated sulfated glycans. We then extended further the analytical workflow to C18 reverse phase (RP)-nanoLC-nanoESI-MS/MS analyses of permethylated sulfated glycans in the negative ion mode. The advantages are that extra sulfates on permethylated di- and multiply sulfated glycans will survive in nanoESI conditions to allow detection of multiply charged intact molecular ions, and more comprehensive MS/MS can be performed in an automated fashion at higher sensitivity, compared with MALDI-MS/MS. Parallel higher energy collision dissociation (HCD) and ion trap collision induced dissociation (CID)-based MS2, coupled with product-dependent MS3 in data dependent ...
[摘要] [摘要 ] 我们已经开发使得能够对技术sulfoglycomics 基于MALDI-MS映射和全甲基化的硫酸化聚糖的MS / MS测序。然后，我们进一步将分析工作流程扩展到以负离子模式对过甲基化硫酸化聚糖进行C18反相（RP）-nanoLC - nanoESI -MS / MS分析。优点是，全甲基化二硫酸和多硫酸化聚糖上的额外硫酸盐将在nanoESI 条件下存活，从而允许检测多电荷的完整分子离子，并且与MALDI-相比，可以自动方式以更高的灵敏度执行更全面的MS / MS。 MS / MS。基于并行高能碰撞解离（HCD）和离子阱碰撞诱导解离（CID）的MS 2 ，在数据依赖的采集模式下结合产物依赖的MS 3 被证明在解析和鉴定异构化的硫酸化聚糖结构上具有很高的生产力。内部glycomic 数据挖掘软件，GlyPick ，被开发并用于自动识别和目标硫酸化的相对定量下游工艺glycotopes 基于其诊断MS的累积强度2根离子从数千HCD-MS的萃取2 和/或CID -MS 2 数据。
[背景 ] 当前质谱（MS）为基础的glycomic 映射仍然不足划定的全部复杂性糖组。尽管MALDI-MS定位和MS / MS测序将有效地提供非常有用的第一印象糖组学特征，但几乎不可能在检测到的每个推定的聚糖信号上获得MALDI-MS / ...
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