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Date:
2020-05-20
[Abstract] Exploring the structure and function of protein complexes requires their isolation in the native state–a task that is made challenging when studying labile and/or low abundant complexes. The difficulties in preparing membrane-protein complexes are especially notorious. The cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 is a widely used model organism for the physiology of oxygenic phototrophs, and the biogenesis of membrane-bound photosynthetic complexes has traditionally been studied using this cyanobacterium. In a typical approach, the protein complexes are purified with a combination of His-affinity chromatography and a size-based fractionation method such as gradient ultracentrifugation and/or native electrophoresis. However, His-affinity purification harbors prominent ...
[摘要] [摘要] 探索蛋白质复合物的结构和功能需要在天然状态下对其进行分离- 当研究不稳定和/或低丰度复合物时，这项任务变得具有挑战性。制备膜-蛋白质复合物的困难尤其出名。蓝藻集胞藻 PCC 6803是一种用于氧合营养养分生理的广泛使用的模式生物，传统上已经使用这种蓝细菌研究了膜结合的光合复合物的生物发生。在典型方法中，蛋白质复合物是通过His-affinity色谱法和基于大小的分级分离方法结合纯化的 例如梯度超速离心和/或天然电泳。但是，His亲和纯化带有明显的污染物，许多蛋白质的含量太低，无法进行可行的多步纯化。在这里，我们已经开发出一种纯化方法，用于从膜突囊藻的膜和可溶性级分中分离出3x FLAG标签的蛋白。可溶性蛋白或可溶类囊体经过单一亲和纯化步骤，该步骤利用FLAG亲和树脂的高度特异性结合。彻底洗涤后，使用过量的合成3x FLAG肽在自然条件下将捕获的蛋白质从树脂中释放出来。该方案可以快速分离出纯度极高的低丰度蛋白质复合物。
[背景 ] 蓝藻已被用作优选的模型系统以研究光合蛋白复合物的生物合成和功能的几十年。蓝细菌中的光合作用装置与真核系统（藻类和植物）非常相似，但是蓝细菌具有原核模型的所有优点，例如快速生长和小的基因组，可以轻松地进行基因操作以及使用细菌遗传学的标准工具。特别是，集胞藻。PCC ...
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