| A Parkinson’s Disease-relevant Mitochondrial and Neuronal Morphology High-throughput Screening Assay in LUHMES Cells
|
|
Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Parkinson’s disease is a devastating neurodegenerative disorder affecting 2-3% of the population over 65 years of age. There is currently no disease-modifying treatment. One of the predominant pathological features of Parkinson’s disease is mitochondrial dysfunction, and much work has aimed to identify therapeutic compounds which can restore the disrupted mitochondrial physiology. However, modelling mitochondrial dysfunction in a disease-relevant model, suitable for screening large compound libraries for ameliorative effects, represents a considerable challenge. Primary patient derived cells, SHSY-5Y cells and in vivo models of Parkinson’s disease have been utilized extensively to study the contribution of mitochondrial dysfunction in Parkinson’s. Indeed many ...
[摘要] [摘要]帕金森氏病是一种破坏性神经退行性疾病，影响65岁以上人口的2-3％。目前尚无改善疾病的治疗方法。帕金森氏病的主要病理特征之一是线粒体功能障碍，许多工作旨在鉴定可恢复破坏的线粒体生理的治疗性化合物。然而，在疾病相关模型中对线粒体功能障碍进行建模，适用于筛选大型化合物文库的改善作用，这是一个巨大的挑战。病人原代细胞，SHSY-5Y细胞和体内 帕金森氏病模型被广泛用于研究线粒体功能障碍在帕金森氏症中的作用。确实，许多研究已经利用LUHMES细胞研究帕金森氏病，但是，尽管与其他常用模型相比，LUHMES细胞与其他常用模型相比具有多种优势，例如快速分化和高均一性，但以前并未用作PD相关的线粒体功能障碍的复合筛选模型。 （例如，与来自iPSC的神经元相反），以及与人类中脑组织相关的生理学，能够分化为高度表达特征性标记的多巴胺能样神经元。在先前产生GFP + -LUHMES细胞以模拟代谢功能障碍后，我们报道了在PD相关的线粒体功能障碍恢复模型中使用GFP + -LUHMES细胞进行高通量化合物筛选的方案。该协议描述了通过评估一系列线粒体和神经元形态学参数，使用强大且可重现的毒素诱导的GFP + -LUHMES细胞模型进行高通量化合物筛选的方法。我们还提供了有关数据和统计分析的详细说明，包括Z'得分的示例计算，以评估独立实验中的统计效应大小。
[背景]帕金森氏病（PD）是一种神经退行性疾病，其主要特征是中脑黑质中多巴胺能神经元的丢失以及神经元内包涵体中α-突触核蛋白的积累。它是第二种最常见的神经退行性疾病，影响65岁以上人口中2-3％的人口（Poewe ...
|
|
|
| Rapid Generation of Human Neuronal Cell Models Enabling Inducible Expression of Proteins-of-interest for Functional Studies
|
|
Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] CRISPR-Cas9 technology has transformed the ability to edit genomic sequences and control gene expression with unprecedented ease and scale. However, precise genomic insertions of coding sequences using this technology remain time-consuming and inefficient because they require introducing adjacent single-strand cuts through Cas9 nickase action and invoking the host-encoded homology-directed repair program through the concomitant introduction of large repair templates. Here, we present a system for the rapid study of any protein-of-interest in two neuronal cell models following its inducible expression from the human AAVS1 safe harbor locus. With lox-flanked foundation cassettes in the AAVS1 site and a tailor-made plasmid for accepting coding sequences-of-interest in ...
[摘要] [摘要] CRISPR-Cas9技术以前所未有的简便性和规模改变了编辑基因组序列和控制基因表达的能力。但是，由于需要引入相邻的单链，因此使用该技术进行精确的基因组编码插入仍然很耗时且效率低下。通过减少Cas9切口酶的作用并通过同时引入大型修复模板来调用宿主编码的同源性指导的修复程序。在此，我们提出了一种系统，用于在其诱导后的两个神经元细胞模型中快速研究任何目的蛋白该系统可从人类AAVS1 安全港基因座表达，在AAVS1 位点具有lox侧翼的基础盒和定制的质粒以接受感兴趣的编码序列，该系统使研究人员能够为诱导型产生自己的神经元细胞模型任何编码表达序列不到一个月的时间。由于可用性Preinserted 增强型绿色的Fluo 可以与目标蛋白质融合的最新蛋白质（EGFP）编码序列，该系统可帮助功能研究通过活细胞显微镜以及利用非常有效的可用性进行的相互作用组分析来跟踪目标蛋白质EGFP捕获矩阵。
[背景] ...
|
|
|