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Date:
2020-05-05
[Abstract] CRISPR-Cas9 technology has transformed the ability to edit genomic sequences and control gene expression with unprecedented ease and scale. However, precise genomic insertions of coding sequences using this technology remain time-consuming and inefficient because they require introducing adjacent single-strand cuts through Cas9 nickase action and invoking the host-encoded homology-directed repair program through the concomitant introduction of large repair templates. Here, we present a system for the rapid study of any protein-of-interest in two neuronal cell models following its inducible expression from the human AAVS1 safe harbor locus. With lox-flanked foundation cassettes in the AAVS1 site and a tailor-made plasmid for accepting coding sequences-of-interest in ...
[摘要] [摘要] CRISPR-Cas9技术以前所未有的简便性和规模改变了编辑基因组序列和控制基因表达的能力。但是，由于需要引入相邻的单链，因此使用该技术进行精确的基因组编码插入仍然很耗时且效率低下。通过减少Cas9切口酶的作用并通过同时引入大型修复模板来调用宿主编码的同源性指导的修复程序。在此，我们提出了一种系统，用于在其诱导后的两个神经元细胞模型中快速研究任何目的蛋白该系统可从人类AAVS1 安全港基因座表达，在AAVS1 位点具有lox侧翼的基础盒和定制的质粒以接受感兴趣的编码序列，该系统使研究人员能够为诱导型产生自己的神经元细胞模型任何编码表达序列不到一个月的时间。由于可用性Preinserted 增强型绿色的Fluo 可以与目标蛋白质融合的最新蛋白质（EGFP）编码序列，该系统可帮助功能研究通过活细胞显微镜以及利用非常有效的可用性进行的相互作用组分析来跟踪目标蛋白质EGFP捕获矩阵。
[背景] ...
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