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Author:
Van T. Luu, Melissa Stiebner, Paula Emmerich Maldonado, Sandra Valdés, Didier Marín, Gerardo Delgado, Virginia Laluz, Lin-Bo Wu, Paul Chavarriaga, Joe Tohme, Inez H. Slamet-Loedin and Wolf B. Frommer,
Date:
2020-09-05
[Abstract] Genetic transformation is crucial for both investigating gene functions and for engineering of crops to introduce new traits. Rice (Oryza sativa L.) is an important model in plant research, since it is the staple food for more than half of the world’s population. As a result, numerous transformation methods have been developed for both indica and japonica rice. Since breeders continuously develop new rice varieties, transformation protocols have to be adapted for each new variety. Here we provide an optimized transformation protocol with detailed tips and tricks for a new African variety Komboka using immature embryos. In Komboka, we obtained an apparent transformation rate of up to 48% for GUS/GFP reporter gene constructs using this optimized protocol. This ...
[摘要]
[摘要 ] 遗传转化对于研究基因功能和农作物工程引入新性状均至关重要。水稻（Oryza sativa L.）是植物研究中的重要模型，因为它是世界一半以上人口的主食。其结果是，大量的转化方法已经开发了两个籼稻和粳稻米。由于育种者不断开发新的水稻品种，因此必须针对每个新品种适应转化方案。在这里，我们为使用未成熟胚的非洲新品种Komboka 提供了一种优化的转化协议，包括详细的技巧和窍门。在Komboka中，我们使用此优化方案对GUS / GFP报告基因构建体的表观转化率高达48％。该协议也适用于其他优质lite 稻品种。
[背景 ] 为植物的遗传转化的各种方法公顷一直在开发，例如穿孔（Shimamoto PEG介导的原生质体转染。等人，1989;达塔。等人，1992），生物射弹转化（Christou的等人，1991）和农杆菌-介导的转化（Slamet-Loedin 等，2014）。农杆菌介导的转化是将DNA引入植物的最广泛使用的方法之一（van Wordragen and Dons，1992）。该方法已被广泛用于研究，并已成为生物技术的关键先决条件。自从开发新的育种技术（如基因组编辑）以来，它就变得越来越重要（Char ...
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Screening with CRISPR/Cas9 technology has already led to significant discoveries in the fields of cancer biology, cell biology and virology. Because of the relatively low false discovery rates and the ability to perform high-throughput, pooled approaches, it has rapidly become the assay of choice for screening studies, including whole-genome screens. Here, we describe a CRISPR screening protocol that allows for efficient screening of the entire life cycle of HIV-1 through packaging of the HIV-CRISPR lentiviral genomes by infecting HIV-1 virus in trans.
[摘要] [摘要 ] CRISPR / Cas9技术的筛选已经在癌症生物学，细胞生物学和病毒学领域引起了重大发现。由于相对较低的错误发现率和执行高通量，合并方法的能力，它发展迅速。成为筛选研究（包括全基因组筛选）的首选检测方法。在此，我们描述了一种CRISPR筛选方案，该方案可通过感染HIV-CRISPR慢病毒基因组来包装，从而有效筛选HIV-1的整个生命周期。病毒1 在 跨。
[背景] 遗传筛选是鉴定影响包括人类免疫缺陷病毒（HIV）在内的病毒复制的新基因的有力工具。鉴定对HIV感染重要的宿主基因有助于增强对HIV复制，进化，传播和发病机制的认识，这是关键利益所在。特别是在过去十年中，通常是干扰素（IFN）刺激基因（ISG）的HIV限制因子的发现已成为逆转录病毒学领域的关键发展。限制因子已集中在过度表达筛选上，以鉴定作用广泛的抗病毒ISG （Schoggins 等，2011）或专门针对HIV的因子（Kane 等，2016）。通过转染对HIV限制因子进行了全基因组筛选siRNA的池池在靶细胞（刘等人，2011年）。然而，这些方法缺乏稳健性，Versa的钛Lity，和高通量方面 因此，我们使用CRISPR / Cas9技术开发了一种创新的ap 方法，并依靠HIV交叉包装通过CRISPR / Cas9文库转导的细胞中表达的慢病毒基因组的能力（OhAinle ...
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