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Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] Neuronal migration is a critical step for the development of neuronal circuits in the brain. Immature new neurons (neuroblasts) generated in the postnatal ventricular-subventricular zone (V-SVZ) show a remarkable potential to migrate for a long distance at a high speed in the postnatal mammalian brain, and are thus a powerful model to analyze the molecular and cellular mechanisms of neuronal migration. Here we describe a methodology for in vitro time-lapse imaging of the primary cilium and its related structures in migrating V-SVZ-derived neuroblasts using confocal or superresolution laser-scanning microscopy. The V-SVZ tissues are dissected from postnatal day 0-1 (P0-1) mouse brains and dissociated into single cells by trypsinization and gentle pipetting. These cells are then ...
[摘要] [摘要]神经元迁移是大脑中神经元回路发展的关键步骤。产后心室-脑室下区（V-SVZ）中产生的未成熟新神经元（神经母细胞）显示出巨大的潜力，可以在产后哺乳动物脑中高速长距离迁移，因此是分析分子和神经元的强大模型。神经元迁移的细胞机制。在这里，我们描述了一种使用共聚焦或超分辨率激光扫描显微镜对V-SVZ衍生的成神经细胞进行迁移的初级纤毛及其相关结构的体外延时成像方法。从出生后的第0-1天（P0-1）小鼠脑中解剖V-SVZ组织，并通过胰蛋白酶消化和温和的移液将其分离成单个细胞。然后用编码目的基因的质粒转导这些细胞，通过离心聚集，并在Matrigel中培养2天。通过共聚焦或超分辨率激光扫描显微镜获取培养的神经母细胞及其睫状结构（包括睫状膜和基体）迁移行为的时移图像。该方法提供了有关成神经细胞形态和睫状结构时空动态的信息，并且广泛适用于各种物种中各种类型的迁移神经元和非神经元细胞。
[背景]在出生后的大脑中，神经干细胞驻留在侧脑室侧壁内衬的心室-心室下区（V-SVZ）中，并不断生成未成熟的新神经元（神经母细胞）（Obernier和Alvarez-Buylla，2019）。这些成神经细胞形成链状细胞聚集体，并通过鼻尖迁移流（RMS）彼此迁移至嗅球（OB）（Luskin，1993; Lois and Alvarez-Buylla，1994; Lois et ...
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] In mammalian organisms, fatty acids (FAs) exist mostly in esterified forms, as building blocks of phospholipids, triglycerides, and cholesteryl esters, while some exist as non-esterified free FAs. The absolute quantification of FA species in total lipids or in a specific lipid class is critical in lipid-metabolism studies. To quantify FAs in biological samples, gas chromatography–hydrogen flame ionization detection (GC-FID)-based methods have been used as highly robust and reliable techniques. Prior to GC-FID analysis, FAs need to be derivatized to volatile FA methyl esters (FAMEs). The derivatization of unsaturated FAs using classical derivatization methods that rely on high reaction temperature requires skill; consequently, the quantification results are often unreliable. The recently ...
[摘要] [摘要] 在哺乳动物生物，脂肪酸（FAS）多云存在处于酯化形式，积木磷脂，甘油三酯和胆固醇酯，而一些存在非酯化游离Fas，绝对定量FA物种在总脂质为了定量分析生物样品中的FA，基于气相色谱-氢火焰离子化检测（GC-FID）的方法已被用作高度健壮和可靠的技术。在FID分析中，FA需要衍生为挥发性FA甲酯（FAME）。使用依赖于高反应温度的经典衍生化方法对不饱和FA进行衍生需要技巧;最终，定量结果通常是不可靠的。程序可以快速可靠地衍生出多种FA物种，包括多不饱和FA（PUFA）。要分析哺乳动物组织样品中的FA，脂质提取 作用和分级分离对于稳健分析也至关重要。在本报告中，我们描述了基于GC-FID的哺乳动物组织样品FA定量的完整方案，包括脂质提取，分级分离，衍生化和定量。 FAs，特别是不饱和FAs，需要可靠地定量。
[背景] 一个˚F 阿蒂酸（FA）是羧酸与脂肪链，和FAS被归类根据自己的链长（短，中，长，很长）的数量和分子内双键（饱和，单在哺乳动物生物体中，FAs主要以酯化形式存在，例如磷脂（PLs），甘油三酸酯（TGs）和胆甾醇酯.PLs是生物膜的主要成分，而TGs作为集中的能量储存体很重要，胆固醇酯和胆固醇酯在胆固醇代谢中起作用（Hishikawa 等，2014 ；Nielsen 等，2014 ；Hui和Howles，2005 ；Van Meer ...
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