| Optimized Immunostaining of Embryonic and Early Postnatal Mouse Brain Sections
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] The mammalian neocortex, the outer layer of the cerebrum and most recently evolved brain region, is characterized by its unique areal and laminar organization. Distinct cortical layers and areas can be identified by the protein expression of graded transcription factors and molecular determinants that define the identity of different projection neurons. Thus, specific detection and visualization of protein expression is crucial for assessing the identity of neocortical neurons and, more broadly, for understanding early and late developmental mechanisms and function of this complex system. Several immunostaining/immunofluorescence methods exist to detect protein expression. Published protocols vary with regard to subtle details, which may impact the final outcome of the immunofluorescence. ...
[摘要] [摘要]哺乳动物的新皮层是大脑的外层，也是最近进化的大脑区域，其特征在于其独特的区域和层状组织。不同的皮质层和区域可以通过分级转录因子的蛋白质表达和定义不同投射神经元身份的分子决定簇来鉴定。因此，蛋白质表达的特异性检测和可视化对于评估新皮层神经元的身份至关重要，更广泛地来说，对于理解这个复杂系统的早期和晚期发育机制和功能至关重要。一些 存在免疫染色/免疫荧光方法来检测蛋白质表达。已发布的方案在细节方面有所不同，可能会影响免疫荧光的最终结果。在这里，我们提供了详细的协议，适用于低温恒温器薄切片和厚振动切片器薄切片，该协议已成功地开发了针对新皮质发育关键分子的抗体。从早期的技术措施测距的大脑采集到的图像分析和统计，我们包括有关样品包容和每一个细节部分ING，幻灯片存储和旨在减少非特异性背景最佳抗体稀释。在实验室中常规使用的，我们的背景优化的免疫染色协议允许区域的有效检测-和层-独特新皮层投射神经元的特定的分子决定因素。
图形摘要：
优化的小鼠脑切片免疫染色方案的工作流程图。一。一个流程图的不同步骤的优化免疫染色协议薄低温恒温器和厚振动切片。乙。例如，用于在薄冠状免疫染色对SATB2和CTIP2部（20 μ ...
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| Pancreatic Acinar Cell Preparation for Oxygen Consumption and Lactate Production Analysis
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Mitochondrial dysfunction is a principal feature of acute pancreatitis (AP) although the underlying mechanisms are still unclear. AP precipitants induce Ca2+-dependent formation of the mitochondrial permeability transition pore (MPTP) in pancreatic acinar cells (PACs), leading to ATP depletion and necrosis. Evaluations of mitochondrial bioenergetics have mainly been performed in isolated PACs using confocal microscopy, with assessment of mitochondrial membrane potential, NADH/FAD+ and ATP levels, coupled with patch-clamp electrophysiology. These studies are technically demanding and time-consuming. Application of Seahorse flux analysis now allows detailed investigations of bioenergetics changes to be performed in cell populations using a multi-well plate-reader ...
[摘要] [摘要 ] 线粒体功能障碍是急性胰腺炎（AP）的主要特征，尽管其潜在机制尚不清楚。AP沉淀剂诱导胰腺腺泡细胞（PACs）中线粒体通透性过渡孔（MPTP）的Ca 2+ 依赖性形成，导致ATP耗竭和坏死。线粒体生物能学的评估主要使用共聚焦显微镜在分离的PAC中进行，评估线粒体膜电位，NADH / FAD + 和ATP水平，以及膜片钳电生理学。这些研究在技术上既费时又费力。应用范围 海马通量分析现在允许使用多孔平板阅读器格式对细胞群体中的生物能学变化进行详细研究；耗氧率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）分别提供有关细胞呼吸和糖酵解的重要信息。诸如最大呼吸，ATP关联容量和质子泄漏等参数可以通过应用呼吸功能“压力”测试得出，该测试涉及电子传输链的药理处理。因此，使用Seahorse Flux分析提供了一种快速，方便的方法来测量详细的细胞生物能学，并使结果与其他基于平板读取器的测定法结合使用，从而更全面地了解线粒体生物能学改变的病理生理后果。
[背景 ] 线粒体功能障碍是急性胰腺炎（AP）的核心特征，急性胰腺炎是一种使人衰弱且可能致命的疾病，目前尚无针对性的治疗方法（Criddle，2016； Habtezion ...
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| Live Cell Imaging of Male Meiosis in Arabidopsis by a Landmark-based System
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Live cell imaging has tremendously promoted our understanding of cellular and subcellular processes such as cell division. Here, we present a step-by-step protocol for a robust and easy-to-use live cell imaging approach to study male meiosis in the plant Arabidopsis thaliana as recently established. Our method relies on the concomitant analysis of two reporter genes that highlight chromosome configurations and microtubule dynamics. In combination, these reporter genes allowed the discrimination of five cellular parameters: cell shape, microtubule array, nucleus position, nucleolus position, and chromatin condensation. These parameters can adopt different states, e.g., the nucleus position can be central or lateral. Analyzing how tightly these states are associated gives ...
[摘要] [摘要 ] 活细胞成像极大地促进了我们对细胞分裂等亚细胞过程的了解。在此，我们提出了一种循序渐进的方案，以一种可靠且易于使用的活细胞成像方法来研究雄性减数分裂。植物拟南芥。由于最近建立了我们的方法依赖于伴随分析中的两个报告基因，突出染色体构和微管动态组合，这些记者基因准许入住歧视五细胞参数：细胞形状，微管阵列，核POSITI 在，核仁位置，染色质凝聚，这些参数可以采用不同的国家，例如，该核位置可以是中央或外侧。分析如何紧密这些国家有关联产生了里程碑阶段，反过来允许定量和定性的解剖减数分裂过程我们设想，这种方法还可以为细胞分化分析提供有价值的标准 减数分裂之外的增强过程。
[背景 ] 减数分裂是一种特殊的细胞分裂周期，有两个主要目的：首先，减数分裂母细胞的DNA含量降低一半，在二倍体生物体中会导致单倍体减数分裂产物。有性繁殖的生物，以便在受精过程中融合了两个配子后，恢复了原始的基因组大小。其次，减数分裂通过亲本染色体（同源染色体或短同源）之间的DNA片段交换（称为减数分裂重组）促进了遗传多样性。通过生成新的但完整的染色体集，其中每个染色体随机存在母亲或父亲的同系物（如果是二倍体生物体）。因此，减数分裂对于不同领域的研究很有趣，从细胞生物学和生殖生物学，从遗传学到进化生物学（Wijn ker 和Schnittger ，2013； Mercier ...
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