| Rapid and Simplified Induction of Neural Stem/Progenitor Cells (NSCs/NPCs) and Neurons from Human Induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs)
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Human induced pluripotent stem cells (iPSCs) and their progeny displaying tissue-specific characteristics have paved the way for regenerative medicine and research in various fields such as the elucidation of the pathological mechanism of diseases and the discovery of drug candidates. iPSC-derived neurons are particularly valuable as it is difficult to analyze neural cells obtained from the central nervous system in humans. For neuronal induction with iPSCs, one of the commonly used approaches is the isolation and expansion of neural rosettes, following the formation of embryonic bodies (EBs). However, this process is laborious, inefficient, and requires further purification of the cells. To overcome these limitations, we have developed an efficient neural induction method that allows for ...
[摘要] [摘要]人类诱导的多能干细胞（iPSC）及其后代具有组织特异性，为再生医学的研究铺平了道路，并在疾病的病理机制阐明和候选药物的发现等领域进行了研究。iPSC集-来源的神经元是特别有价值的，因为它是难以分析神经细胞获自人类的中枢神经系统。对于用iPSC诱导神经元，最常用的方法之一是在形成胚体（EB）之后分离和扩展神经玫瑰花结。然而，该过程费力，效率低下，并且需要进一步纯化细胞。为了克服这些限制，我们已经开发出一种高效神经诱导方法，该方法允许来自于7天内的iPSC神经干/祖细胞（NSCs / NPC的）的产生和功能的成熟神经元的。我们的方法产生一个PAX6 -阳性同质细胞群中，皮质神经干细胞/ NPC的，和t他所得的NSCs / NPC的可冷冻保存，膨胀，并分化在功能性成熟神经元。此外，我们的协议将比其他方法便宜，因为该协议在神经诱导期间需要较少的神经补充。本文还介绍了FM1 - 43成像测定法中，其是用于所述的iPSC衍生的突触前评估中有用的人类神经元。该协议为生成NSC / NPC和神经元提供了一种快速且简化的方法，使研究人员能够建立体外细胞模型来研究脑部疾病的病理学。
[背景]人类iPSC于2007年通过使用四种转录因子（Oct4，Sox2，Klf4和c-Myc）对皮肤成纤维细胞进行重编程而首次建立，并且表现出与胚胎干细胞（ESCs）相似的特征，包括其多能性和自我-更新（Takahashi等，2007； ...
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| Mechanical Tissue Compression and Whole-mount Imaging at Single Cell Resolution for Developing Murine Epididymal Tubules
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Cells inside the body are subjected to various mechanical stress, such as stretch or compression provided by surrounding cells, shear stresses by blood or lymph flows, and normal stresses by luminal liquids. Force loading to the biological tissues is a fundamental method to better understand cellular responses to such mechanical stimuli. There have been many studies on compression or stretch experiments that target culture cells attached to a flexible extensible material including polydimethylsiloxane (PDMS); however, the know-how of those targeting to tissues is still incomplete. Here we present the protocol for mechanical tissue compression and image-based analysis by focusing on developing murine epididymis as an example. We show a series of steps including tissue dissection from ...
[摘要] [摘要 ] 细胞我n侧主体经受各种机械应力，例如通过管腔液体拉伸或通过血液或淋巴周围细胞的剪切应力提供的压缩流，并且正常的应力。力加载到生物组织上是一种基本方法，可以更好地了解细胞对此类机械刺激的反应。关于压缩或拉伸实验，已有许多研究针对以附着于包括聚二甲基硅氧烷（PDMS）在内的柔性可扩展材料的培养细胞为目标的研究。然而，知道的-如何与靶向组织仍然是不完整的。 在这里，我们以开发小鼠附睾为例，介绍用于机械组织压缩和基于图像的分析的协议。我们显示了一系列步骤，包括从鼠胚胎中解剖组织，使用手动设备进行基于水凝胶的压缩方法以及无损容积组织成像。该协议对于定量和探索组织水平的生物机械反应系统很有用。
[背景 ] 细胞可以对机械刺激作出反应通过细胞内的生物化学信号传导途径。已知这种细胞机械反应在诸如胚胎发育，再生，组织稳态和癌症转移的各种生物过程中起着基本作用（Mammoto 等，2013； Humphrey 等，2014； Vining和Mooney，2017）。最近有关向细胞外部施加力的实验表明细胞如何对给定的机械刺激作出反应。例如，已显示出拉伸或压缩附着在诸如聚二甲基硅氧烷（PDMS）之类的柔性有机硅基材上的细胞单层会触发机械敏感离子通道蛋白Piezo1，从而引起各种细胞行为，例如细胞分裂和挤压，从而导致体内稳态的细胞数量增加。组织（Eisenhoffer ...
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| Split Nano Luciferase-based Assay to Measure Assembly of Japanese Encephalitis Virus
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Cells infected with flavivirus release various forms of infectious and non-infectious particles as products and by-products. Comprehensive profiling of the released particles by density gradient centrifugation is informative for understanding viral particle assembly. However, it is difficult to detect low-abundance minor particles in such analyses. We developed a method for viral particle analysis that integrates a high-sensitivity split luciferase system and density gradient centrifugation. This protocol enables high-resolution profiling of particles produced by cells expressing Japanese encephalitis virus factors.
[摘要] [ 摘要] 黄病毒感染的细胞释放出各种形式的传染性和非传染性颗粒，分别作为产物和副产物。通过密度梯度离心对释放的颗粒进行全面分析，有助于理解病毒颗粒的组装，但是很难检测到低水平的病毒颗粒。我们开发了一种将高灵敏度分裂荧光素酶系统和密度梯度离心相结合的病毒颗粒分析方法，该协议可对表达日本脑炎病毒因子的细胞产生的颗粒进行高分辨率分析。
[ 背景 ] 黄病毒是包括病毒，登革热病毒，西尼罗河病毒，tick传脑炎病毒，寨卡病毒，黄热病病毒和日本脑炎病毒（JEV）在内的一组虫媒病毒，与人类的大量发病和死亡相关（ Chambers 等人，1990）。黄病毒具有编码长多肽的单个ORF基因组，该ORF基因组在翻译后被切割成三个结构性（C，prM 和E）和七个非结构性（NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A）。 ，NS4B和NS5）蛋白通过宿主信号肽酶和NS2B-NS3病毒蛋白酶（Chambers 等，1990）。
由NS5 RNA依赖的RNA聚合酶合成的病毒基因组RNA与C蛋白结合形成核衣壳，然后将其包装在由宿主细胞衍生的脂质膜，病毒prM 和E跨膜蛋白组成的包膜中以形成病毒体。已经发现，缺乏所有结构基因的还原型黄病毒基因组RNA被称为亚基因组复制子，可以在宿主细胞中自我复制（Suzuki ...
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