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Date:
2020-04-20
[Abstract] Mutations in RNA-binding proteins (RBPs) such as TDP43 are associated with transcriptome-wide splicing defects and cause severe neurodegenerative diseases, including amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and frontotemporal dementia (FTD). The impact of RBP mutations on splicing function is routinely studied using PCR-based bulk measurements. However, the qualitative and low-throughput nature of this assay make quantitative and systematic analyses, as well as screening approaches, difficult to implement. To overcome this hurdle, we have developed a quantitative, high-throughput flow cytometry assay to investigate TDP43 splicing function on a single-cell level
[摘要] [摘要 ] TDP43等RNA结合蛋白（RBP）突变与转录组范围的剪接缺陷相关，并引起严重的神经退行性疾病，包括肌萎缩性侧索硬化症（ALS）和额颞痴呆（FTD）。RBP突变对剪接的影响通常使用基于PCR的大量测量方法来研究其功能。但是，该方法的定性和低通量性质使得难以进行定量和系统的分析以及筛选方法。为克服这一障碍，我们开发了定量，高通量流式细胞仪检测单细胞水平的TDP43剪接功能
[背景 ] RNA结合蛋白（RBPs）（例如TDP43）通过协调RNA的稳定性，转运和加工（包括mRNA剪接）来调节转录后基因的调控（Gerstberger 等，2014）。突变和/导致RBP功能受损或聚集与许多神经退行性疾病的病因有关，例如肌萎缩性侧索硬化症（ALS）和额颞痴呆（FTD）（Harrison and Shorter，2017）。值得注意的是，与RBPs相关的ALS相关突变如TDP43可以引起转录组范围的剪接。缺陷，提示RBP剪接功能的失调可能是疾病的关键驱动因素（Arnold 等，2013; Sun 等，2015）。因此，ALS研究的一个重要目标是揭示RBP功能的分子机制，需要实验方法来系统询问RBP剪接功能。
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