| In-vitro GLP-1 Release Assay Using STC-1 Cells
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] Enteroendocrine cells (EECs) are known chemosensors in the gastrointestinal (GI) epithelium. They release a diversity of gut hormones in response to various stimuli. Here, we report an in-vitro assay to measure GLP-1 release from cultured murine EEC’s under fatty acid stimulation.
[摘要] [摘要] 肠内分泌细胞（EEC）是胃肠道（GI）上皮中的已知化学传感器。它们响应各种刺激而释放多种肠激素。在这里，我们报告了一种体外测定法，以测量在脂肪酸刺激下培养的鼠EEC中GLP-1的释放。
[背景] 肠上皮是人体与环境之间最大的界面。该界面由单个上皮层组成，包含多个具有独特功能角色的不同细胞类型。与LGR5阳性上皮干细胞不同，肠内分泌细胞（EEC）沿整个胃肠道散布在整个上皮中。EEC通过产生和分泌多种激素，在对营养和其他刺激的反应中起关键作用。传统上，这些细胞是按照荷尔蒙特征来分类的（Nausheen 等人，2013； Latorre 等人，2016； Verhoeckx 等人，2015a），尽管随着单细胞RNA测序的到来，我们逐渐意识到这些细胞中的大多数分泌多种激素（Haber 等人，2017; Billing 等人，2019）。EEC的亚型L细胞由胰高血糖素样肽1和2（GLP-1和GLP-2）的产生定义，也可能分泌YY肽（PYY）和胰岛素样肽5（INSL5） 。大多数L细胞见于回肠末端和结肠，而另一些也见于十二指肠和空肠近端。L细胞表面的受体使它们能够直接感知管腔成分并产生适当的激素反应。L细胞上最显着的营养成分和食物成分受体是经典的味觉受体，游离脂肪酸受体以及蛋白质及其产物的受体（Drucker 和Nauck ，2006年；Furness ...
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| Confocal and Super-resolution Imaging of RNA in Live Bacteria Using a Fluorogenic Silicon Rhodamine-binding Aptamer
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Genetically encoded light-up RNA aptamers have been shown to be promising tools for the visualization of RNAs in living cells, helping us to advance our understanding of the broad and complex life of RNA. Although a handful of light-up aptamers spanning the visible wavelength region have been developed, none of them have yet been reported to be compatible with advanced super-resolution techniques, mainly due to poor photophysical properties of their small-molecule fluorogens. Here, we describe a detailed protocol for fluorescence microscopy of mRNA in live bacteria using the recently reported fluorogenic silicon rhodamine binding aptamer (SiRA) featuring excellent photophysical properties. Notably, with SiRA, we demonstrated the first aptamer-based RNA visualization using super-resolution ...
[摘要] [摘要 ] 遗传编码的点亮适体是显示活细胞中RNA的有前途的工具，可帮助我们加深对RNA广泛而复杂的生命的理解。可见光波长区已经被开发，他们都没有然而，据报道，在兼容先进的超分辨率技术，主要是由于不良的光物理性质其小分子荧光团。在这里，我们描述了一个详细的协议对于荧光显微镜mRNA的使用最近报道的具有优异光物理性质的荧光罗丹明结合适体（SiRA ）在活细菌中进行检测。值得注意的是，我们利用SiRA 展示了首个使用超分辨率（STED）显微镜进行的基于适体的RNA可视化。这种成像方法可能特别有价值用于可视化原核生物中的RNA，因为细菌的大小仅比光学分辨率大几倍 传统显微镜的分辨率。
[背景 ] 可视化的具体RNA分子通过荧光显微镜具有不可估量的价值在过去二十年中扩大我们的知识RNA功能内的细胞在时空精气神（特亚吉，2009年;夏等人，2017年），由于缺乏。固有的荧光RNA，用于活细胞成像的荧光RNA标记工具的开发以及它们对最新显微镜的适应性 –特别是对于超分辨率显微镜– 势在必行。超分辨率显微镜（SRM）对于原核系统中的RNA成像特别有吸引力，因为细菌很小（〜2.5MYU中号长，0.5-1〜MYU 中号宽）和分辨率的标准荧光显微镜被限制在200〜300〜牛米，由于衍射极限光（Reshes ...
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| Environmental Conditioning and Aerosol Infection of Mice
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Author:
Date:
2020-04-20
[Abstract] Influenza infection models in mice are widely used to study flu-mediated immune responses and pathology. However, most laboratory mice are housed at 20 °C and 50% relative humidity (RH). To better recapitulate influenza epidemics and immune responses during winter seasons, mice were housed at 20 °C under different humidity conditions, 10-20% or 50% RH. Here, we describe a protocol for using aerosolized droplets to infect mice with influenza under different environmental conditions. Using this method enables influenza infection studies performed under more physiologically relevant conditions which better mimics human viral exposure.
[摘要] [摘要 ] 小鼠的流感感染模型被广泛用于研究流感介导的免疫反应和病理学。然而，大多数实验室小鼠被安置在20 °C 和50％相对湿度（RH）的条件下，以更好地概括流感流行和免疫应答。在冬季，将小鼠饲养在20 °C，不同湿度条件下，相对湿度10-20％或50％的环境中，在此，我们描述了一种在不同环境条件下使用雾化液滴感染小鼠的方案。在生理上更相关的条件下进行的研究，可以更好地模拟人的病毒暴露。
[背景 ] 甲型流感病毒（I AVs）是世界上季节性呼吸道感染的主要原因之一，每年导致50万人死亡（Johnson 等，2014）。冬季温带地区爆发IAV ，高峰十一月至三月在北半球之间五月至九月在南半球之间（Tamerius 等，2013;阿隆索等人，2015年）。病毒学研究的豚鼠表明，低温低湿实现了更好的空气传播流感病毒（洛文等，2007） 。此外，流行病学研究表明，一滴水在绝对湿度相关因素密切配合上升，流感相关的死亡在人类（萨满等，2010） 。值得注意的是，在热带在潮湿和温暖的亚热带气候区，病毒可以在物体表面繁殖并引起细小病毒传播（Shek和Lee ，2003；Moura 等，2009）。
实验室小鼠一般维持在宏观环境的温度和相对湿度范围为64〜79°F（17.8到26.1°C）和30 Pasento为70 ...
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