| Using the Parafilm-assisted Microdissection (PAM) Method to Sample Rodent Nucleus Accumbens
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Author:
Date:
2020-12-05
[Abstract] Microdissection techniques are very important for anatomical and functional studies focused on neuroscience, where it is often necessary microdissect specific brain areas to perform molecular or anatomical analyses. The parafilm®-assisted microdissection (PAM) was previously described and involves the microdissection of tissue sections mounted on parafilm-covered glass slides. In this work, we describe the use of the PAM method to microdissect rodent nucleus accumbens (NAc). (1) We first describe the best way to perform the mouse euthanasia and how to remove the brain. (2) Next, we describe how to prepare the slides with parafilm® that will be used to receive the brain slices. (3) Following, we describe how to handle the brain in the cryostat, how to align ...
[摘要] [摘要]显微解剖技术对于专注于神经科学的解剖学和功能研究非常重要，在显微学中，通常有必要对特定的大脑区域进行显微解剖以进行分子或解剖学分析。石蜡膜® -assisted显微切割（PAM）先前描述的，并且涉及安装在封口膜覆盖的载玻片上的组织切片的显微切割。在这项工作中，我们描述了使用PAM方法微分散啮齿动物伏隔核（NAc）。（1）我们首先描述执行小鼠安乐死的最佳方法以及如何去除大脑。（2）接下来，我们介绍如何用石蜡制作的幻灯片® 那将被用来接收大脑切片。（3）接下来，我们描述如何在低温恒温器中处理大脑，如何对齐半球以及如何识别NAc前后限。（4）我们还描述了如何对切片进行染色和脱水，这是促进显微切割和保存大分子的关键步骤。（5）在最后一步，我们描述了如何识别NAc的背腹和后内侧界限，以及最后如何进行该区域的手动显微解剖。这是一种低成本的技术，该技术允许研究者具体microdissect任何脑区域，从该完整的RNA和蛋白质可被提取为执行几个分子分析（例如。，实时PCR，西方印迹和RNA-SEQ）。
[背景]伏隔核（NAC）是位于纹状体的rostroventral部分基底节的一部分。具体而言，NAc是我们称为腹侧纹状体的结构的一部分，该结构也包含嗅觉结节。众所周知，NAc在多巴胺能中脑边缘途径中的作用，其调节动机行为并对情绪和情境行为负责（Baik，2013）。伏隔核已经被牵连的精神疾病（例如，抑郁症），药物成瘾，肥胖，慢性疼痛，这表明在研究这个大脑结构的神经生物学的相关性（内斯特勒和Carlezon，2006;沃尔科夫等，2011;沃尔科夫和Morales，2015；Brandão等，2019； ...
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| Auxin-mediated Protein Degradation in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2020-04-20
[Abstract] The auxin-inducible degron (AID) technology was recently adapted for use in the nematode Caenorhabditis elegans. Rapid degradation of C. elegans proteins tagged with an AID is mediated by a plant-specific F-box protein, transport inhibitor response 1 (TIR1), and occurs only in the presence of the phytohormone auxin. The first iteration of this technology elicited protein degradation in C. elegans through a naturally occurring form of auxin, indole-3-acetic acid (IAA). Here, we present a protocol that uses 1-naphthaleneacetic acid, potassium salt (K-NAA), an indole-free synthetic auxin analog. At equal concentration, K-NAA is as effective as IAA in standard nematode growth media (NGM). K-NAA is also effective in physiological buffer (M9), allowing for ...
[摘要] [摘要 ] 植物生长素诱导的德隆（AID）技术最近被用于线虫秀丽隐杆线虫。带有AID标签的秀丽隐杆线虫蛋白的快速降解是由植物特异性F-box蛋白介导的，转运抑制剂反应1 （TIR1），而且只发生在存在的植物激素生长素。第一次迭代的这项技术引起蛋白质降解C. 线虫通过一个天然存在形式的生长素，吲哚-3-乙酸（IAA）。在此，我们协议用途1-萘乙酸，钾盐（K-NAA），一个，自由吲哚合成的植物生长素类似物。在相等浓度 ，K-NAA在标准线虫生长培养基（NGM）中与IAA一样有效。K-NAA在生理缓冲液（M9）中也有效，可以进行高通量实验。K-NAA的主要优点有两个：它的光稳定性可防止光诱导的化合物在储存过程中降解以及在活细胞的荧光显微镜检查过程中产生有毒的吲哚衍生物;其次，其水溶性消除了使用乙醇溶解植物生长素化合物（一种可能混淆C 的溶剂）的需要。线虫寿命和行为分析。在这个协议中，我们描述方法降解菌的C. elegans的使用K-NAA对固体和液体介质的蛋白质，以及我们的方法分析蛋白质降解。
[背景 ] 有条件的蛋白质降解通过降解决定子是一个新兴的方法研究蛋白质功能在秀丽隐杆线虫（拔头筹而Frokjaer -詹森2019年）。现在的降解决定子的方法包括ZF1 （Armenti 等人。2014年，萨累。等，2018） ，生长素诱导型德龙（AID）（Zhang ...
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