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Potassium indigotetrasulfonate (ITS)
Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: 340596
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Other protocol()
Determination of Flavin Potential in Proteins by Xanthine/Xanthine Oxidase Method
Author:
Date:
2020-04-05
[Abstract]  This protocol describes a simple xanthine/xanthine oxidase enzymatic equilibration method for determination of the redox potential of a flavin. As an example of the use of this method, we determine the reduction potential of the covalently bound FAD cofactor (Em = -55 mV) in the SdhA flavoprotein subunit of succinate dehydrogenase from Escherichia coli. In principle, this method can be used routinely to determine the redox potential of flavin cofactors in any simple flavoprotein from equilibrium concentrations with an appropriate reference dye of known Em without the use of sophisticated electrochemical equipment. [摘要]  [摘要] 该协议描述了一种简单的黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶酶平衡方法，用于测定黄素的氧化还原电位。作为使用此方法的一个例子，我们确定了大肠杆菌中琥珀酸脱氢酶的SdhA 黄素亚基中共价结合的FAD辅因子的还原电位（E m = -55 mV）。原则上，该方法可常规用于通过平衡浓度和已知E m 的适当参考染料确定任何简单黄素蛋白中黄素辅因子的氧化还原电位。 无需使用复杂的电化学设备。


[背景] 几种生物物理方法可用于测量蛋白质中黄素的还原中点电位（E m ）。这些电位测量方法通常依赖于目标蛋白质和电极之间的电化学偶联。例如，在带有其他辅助因子（例如铁硫中心和醌）的复杂黄素蛋白中，常常使用电化学方法和电子顺磁共振（EPR）光谱来确定氧化还原中心的E m （Kowal 等，1995；Saenger等，等人，2005； Hudson 等人，2005； Cheng 等人，2015）。然而，在只包含黄素氧化还原中心简单黄素蛋白，辅助因子，可以直接通过它不需要特殊的设备电化学或昂贵的EPR仪表传统光学分光光度法研究。1990年，文森特·梅西（Vincent Massey）提出了一种简单的方法，该方法可以从氧化和还原伴侣（即黄素蛋白和参考染料）的平衡浓度中确定黄素的还原电位（Massey，1991）。该方法不直接测量黄素的还原电势，而是确定黄素和参考染料的E m ...

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