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Date:
2020-11-05
[Abstract] Cell-type specific transcriptional programs underlie the development and maintenance of organs. Not only distinct cell types within a tissue, even cells with supposedly identical cell fates show a high degree of transcriptional heterogeneity. Inevitable, low cell numbers are a major hurdle to study transcriptomes of pure cell populations. Here we describe DigiTAG, a high-throughput method that combines transposase fragmentation and molecular barcoding to retrieve high quality transcriptome data of rare cell types in Drosophila melanogaster. The protocol showcases how DigiTAG can be used to analyse the transcriptome of rare neural stem cells (type II neuroblasts) of Drosophila larval brains, but can also be utilized for other cell types or model systems.
[摘要] [摘要]细胞类型的特定转录程序是器官的发育和维持的基础。不仅组织内不同的细胞类型,甚至具有相同细胞命运的细胞也显示出高度的转录异质性。不可避免的是,低细胞数量是研究纯细胞群体转录组的主要障碍。在这里,我们介绍DigiTAG ,这是一种高通量方法,将转座酶片段化和分子条形码相结合,以检索果蝇中稀有细胞类型的高质量转录组数据。该协议展示了DigiTAG如何可用于分析果蝇幼虫的罕见神经干细胞(II型成神经细胞)的转录组 大脑,但也可以用于其他细胞类型或模型系统。
[背景]在发育过程中,不同细胞类型之间的过渡与组织稳态之间的关系是由大量转录因子及其诱导的转录变化所精心安排的。在过去的十年中,RNA测序(RNA- seq )已成为测量整个基因组转录动力学的经典方法(Stark等,2019)。组织上的大量RNA序列不允许研究不同细胞群体的转录网络,特别是稀有细胞类型的转录网络。因此,需要提供低输入样品高质量转录组的RNA- seq方案。
在果蝇中,有限的材料通常构成分析特定组织或细胞类型的障碍。果蝇神经干细胞(称为神经母细胞)很好地说明了这一点(Homem和Knoblich ,2012)。存在成神经细胞的几个不同的亚群。例如,在果蝇的幼虫大脑中,只有16种II型成神经细胞产生神经元,神经元支配了运动和感觉处理所需的大脑区域(Walsh and ...
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Date:
2020-03-20
[Abstract] The single-cell transcriptome is the set of messenger RNA molecules expressed in one cell. It is extremely variable and changes according to external, physical and biochemical conditions. Due to sensitivity shortages, most of genetic studies use bulk samples, providing only the average gene expression. Single-cell technologies have provided a powerful approach to a more detailed understanding of the heterogenic populations and minority cells. However, since it is still a quite novel technique, standardized protocol has to be established. Single-cell qPCR, although partly limited by the number of genes, is relatively simple to analyze. Therefore, its use is accessible without the necessity to recourse to complex bioinformatics analyses. The main steps for single-cell qPCR, as illustrated ...
[摘要] [摘要 ] 单细胞转录组是在一个细胞中表达的信使RNA分子的集合。它变化很大,并会根据外部,物理和生化条件而变化。由于敏感性不足,大多数基因研究使用大量样品,仅提供平均基因表达。单细胞技术提供了一种强大的方法,可以更详细地了解异质群体和少数细胞。然而,因为它仍然是一个相当新的技术,标准化协议具有至b e建立。尽管单细胞qPCR受基因数量的限制,但分析起来相对简单。因此,无需使用复杂的生物信息学分析就可以使用它。如本协议所述,单细胞qPCR的主要步骤包括单细胞分离,细胞裂解液,cDNA逆转录合成,cDNA库生成的扩增以及最终的定量聚合酶链反应。
[背景 ] 的单细胞转录是一套完整的在一个细胞中表达的信使RNA(mRNA)分子。它变化很大,并会根据外部,物理和生化条件而变化。因此,这是生物异质性的来源,其中来自相同环境的细胞与其他细胞相似但不相同。
由于灵敏度不足,大多数遗传研究使用大量样本,其中有数百至数千个细胞,仅提供平均基因表达。这极大地限制了少数细胞群体的研究,这可能会带来特定的特性,例如在癌症情况下的耐药性或转移能力。单细胞技术能够在单细胞水平上分析转录组,从而揭示了异源群体的复杂性。这些技术不仅应用于癌症,而且还应用于许多细胞生物学研究中,包括成年组织,干细胞,免疫细胞等。以及微生物学和病毒学等其他领域(Wen and ...
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