| Improved Macrophage Isolation from Mouse Skeletal Muscle
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Macrophages are a heterogeneous class of innate immune cells that offer a primary line of defense to the body by phagocytizing pathogens, digesting them, and presenting the antigens to T and B cells to initiate adaptive immunity. Through specialized pro-inflammatory or anti-inflammatory activities, macrophages also directly contribute to the clearance of infections and the repair of tissue injury. Macrophages are distributed throughout the body and largely carry out tissue-specific functions. In skeletal muscle, macrophages regulate tissue repair and regeneration; however, the characteristics of these macrophages are not yet fully understood, and their involvement in skeletal muscle aging remains to be elucidated. To investigate these functions, it is critical to be able to efficiently ...
[摘要] [摘要]巨噬细胞是异质类，提供防御的在主体上的主线路先天免疫细胞的通过phagocyt定义的病原体，消化荷兰国际集团它们，本荷兰国际集团的抗原的T和B细胞以引发适应性免疫。通过专门的促炎或抗炎活动，巨噬细胞也直接有助于清除感染和修复组织损伤。巨噬细胞分布在全身，并主要执行组织特定功能。在骨骼肌中，巨噬细胞调节组织的修复和再生。H 然而，这些巨噬细胞的特征还没有被完全理解，它们在骨骼肌衰老中的作用还有待阐明。为了研究这些功能，至关重要的是能够有效地从骨骼肌中分离出足够的纯度和产量的巨噬细胞用于各种下游分析。在这里，我们详细描述了一种从小鼠中分离骨骼肌巨噬细胞的优化方法。这种方法已允许的isolat的离子的高纯度CD45 + / CD11b的+从年轻和年老小鼠，其可以进一步用于流巨噬细胞cytometr ÿ分析，荧光激活细胞分选（FACS），和单细胞RNA测序。
[背景] Metchnikoff及其同事在一个多世纪以前发现巨噬细胞为“专业”吞噬细胞（Underhill等，2016）。后来的研究表明，巨噬细胞构成一类异质的细胞，在整个人体的组织中发挥着不同的功能（Wynn等人，2013）。巨噬细胞可分为两种主要类型：组织驻留巨噬细胞和非组织驻留巨噬细胞（Ginhoux和Guilliams ...
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| Evaluation of B Cell Proliferation in vivo by EdU Incorporation Assay
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Generation of antibodies is crucial for establishing enduring protection from invading pathogens, as well as for maintaining homeostasis with commensal bacteria at mucosal surfaces. Chronic exposure to microbiota- and dietary- derived antigens results in continuous production of antibody producing cells within the Peyer’s patch germinal center structures. Recently, we have shown that B cells responding to gut-derived antigens colonize the subepithelial dome (SED) in Peyer’s patches and rapidly proliferate independently of their relative BCR affinity. To evaluate B cell proliferation within different niches in Peyer’s patches, we applied in vivo EdU incorporation assay as described in this protocol.
[摘要] [摘要] 抗体的产生对于建立持久保护免受入侵的病原体以及在粘膜表面维持共生细菌的稳态至关重要。长期暴露于微生物和饮食来源的抗原可导致Peyer's淋巴瘤中不断产生抗体的细胞最近，我们发现对肠道源性抗原有反应的B细胞在Peyer's斑块中上皮下穹顶（SED）定居并迅速增殖，而与它们的相对BCR亲和力无关。评估Peyer's斑块中不同壁ches中的B细胞增殖。 ，我们按照此方案中所述进行了体内EdU 掺入分析。
[背景] 长寿命抗体生成细胞，也被称为浆或血浆细胞（PC机）主要都来源于生发中心（GCS），显微解剖的网站，表单中的免疫器官感染后或免疫接种。进入GC反应涉及亲和基础的B细胞的竞争，每个细胞都表达对抗原具有特定亲和力和特异性的抗原特异性B细胞受体（BCR），一旦遇到抗原，B细胞就会发生活化，并伴随着通过快速增殖的广泛克隆扩增。斑块（PPs）是位于小肠的淋巴器官，是B细胞类将其免疫球蛋白转换为IgA 的主要部位。上皮下穹S（SED）是PP中的一个小生境，其中免疫细胞（包括B细胞）与在PPs中发生GC前事件期间，带有高亲和力BCR的B细胞在SED的定殖和形成过程中没有表现出优先优势 的PC，表明在该位点没有发生基于亲和力的竞争（Biram et al。，2019），尽管如此，只有高亲和力的克隆进入GC结构并进入生发中心反应。外周淋巴结，脾脏和PP中的GC ...
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| Characterization of Immunological Niches within Peyer’s Patches by ex vivo Photoactivation and Flow Cytometry Analysis
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] T follicular helper (Tfh) cells regulate B cell selection for entry into the germinal center (GC) reaction or for differentiation into antibody forming cells. This process takes place at the border between the T and B zones in lymphoid organs and involves physical contacts between T and B cells. During these interactions, T cells endow the B cells with selection signals that promote GC seeding or plasmablast differentiation based on their B cell receptor affinity. In Peyer’s patches (PPs), T cells promote B cell colonization of the subepithelial dome (SED) without effective affinity-based clonal selection. To specifically characterize the T cell population that resides within the SED niche, we performed ex vivo photoactivation of the SED compartment followed by flow cytometry ...
[摘要] [摘要] T卵泡辅助细胞（Tfh ）调节B细胞的选择，使其进入生发中心（GC）反应或分化为抗体形成细胞。此过程发生在淋巴器官的T和B区之间的边界，涉及T和B细胞之间的物理接触。在这些相互作用中，T细胞赋予B细胞选择信号，这些信号根据其B细胞受体亲和力促进GC接种或成浆细胞分化。在Peyer氏斑（PPs）中，T细胞在没有有效亲和力的情况下促进上皮下穹sub （SED）的B细胞定殖。 ed克隆选择。为了具体表征驻留在SED利基空间中的T细胞群体，我们按照本方案中所述对SED隔室进行了离体光激活，然后进行了标记细胞的流式细胞仪分析。该技术将空间和细胞信息整合到了免疫小生境研究中，可以适应各种实验系统。
【背景技术】亲和力成熟是血清抗体对特定抗原的亲和力随时间而增加的过程，这是通过在生发中心（GC）中选择带有高亲和力BCR的B细胞来实现的。增加抗体亲和力通过体细胞超突变和基于亲和力的选择，这由T滤泡辅助（编排的处理的反复循环介导的TFH ）细胞奥普雷亚;（开普勒和Perelson，1993 和Perelson，1997; Victora和Nussenzweig， 2012）。GC由两个微观解剖部位组成；暗区（B细胞增殖并获得体细胞超突变）和亮区（B细胞与相关抗原和T细胞相互作用）。尽管活体成像技术能够确定GC中的免疫细胞动力学（Allen 等，2007； ...
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