| Karyopherin-β2 Inhibits and Reverses Aggregation and Liquid-liquid Phase Separation of the ALS/FTD-Associated Protein FUS
|
|
Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] The study of RNA-binding proteins (RBP) offers insight into the mechanisms of pathologic protein aggregation in neurodegenerative diseases. We developed a protocol for purifying an RBP FUS and a nuclear import receptor (NIR) Kapβ2 and testing the ability of Kapβ2 to mitigate FUS aggregation and liquid-liquid phase separation.
[摘要] [摘要] RNA结合蛋白的研究（RBP）报价洞察病理蛋白聚集的神经变性疾病的机制。我们开发了用于纯化RBP FUS和核输入受体（NIR）Kapβ2 的协议，并测试Kapβ2 减轻FUS聚集和液-液相分离的能力。
[背景] 肌萎缩性脊髓侧索硬化症（ALS）和额颞叶痴呆（FTD）是神经变性疾病，其特征在于所述错误定位几个RNA结合蛋白的和聚集（RBP）（麦肯齐等人，2010;达克鲁斯和克利夫兰，2011； King 等，2012）。其中一种蛋白是FUS（融合在肉瘤中），一种核蛋白在ALS / FTD患者的神经元细胞质中定位不正确，然后经历液-液相转变，然后发生异常的相转变，形成不溶性聚集体（Altmeyer 等， 2015; Burke 等人，2015; Lin 等人，2015; Molliex 等人，2015; Murakami 等人，2015; Patel 等人，2015）（图1）。Karyopherin-β2（甲β2），一个核输入受体（NIR），已经建立了作为伴侣和disaggregase 蛋白与PY-核定位序列（NLS），诸如FUS（过等人，2018; Hofweber 等人。，2018;吉泽，等人。，2018）。以下方案被开发，以测试的能力甲β2抑制和反向FUS聚合和相分离的离体（过等人，2018）。
D：\ ...
|
|
|
| Molecular Size Analysis of Recombinant Importin-histone Complexes Using Analytical Ultracentrifugation
|
|
Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Histones constitute the protein components of nucleosomes. Despite their small sizes, histones do not diffuse through the nuclear pore complex. Instead, they are transported to the nucleus by importins, either alone or in complex with histone chaperones. Determining the molecular size of the importin-histone complexes is key to understanding the mechanism of histone transport and also the potential roles of importins as histone chaperones and in the assembly of nucleosomes. Here we report a simple and reproducible sedimentation-velocity based method to determine the molecular sizes of importin-histone complexes using analytical ultracentrifugation. The method does not use any reporter tags or interaction with column resin thereby analyzing the interactions of the native proteins.
[摘要] [摘要] 组蛋白构成核小体的蛋白质成分。尽管其尺寸很小，但组蛋白不会通过核孔复合物扩散。取而代之的是，它们单独或与组蛋白分子伴侣复合地被重要蛋白转运至细胞核。确定importin-histone复合物的分子大小是理解组蛋白转运机制的关键，也是importins作为组蛋白伴侣和在核小体组装中的潜在作用的关键。在这里，我们报告了一种简单且可重现的沉降速度为基础的方法，该方法使用分析超速离心法来确定importin-histone配合物的分子大小。该方法不使用任何报告子标签或与色谱柱树脂的相互作用，从而分析了天然蛋白质的相互作用。
[背景] 核小体是真核染色质的最基本的结构和功能单元。组蛋白H2A，H2B，H3和H 4是核小体的蛋白质成分。每个核包括147个碱基的DNA wrapp的对编绕Ñ H3-H4四聚体和H2A-H2B二聚体的两个拷贝（Luger的等人，1997年一）。像细胞中的其他蛋白质一样，组蛋白在细胞质中合成。然而，核小体组装在核中。尽管它们的小尺寸（单体是10-15 kDa）的，组蛋白不通过核孔复合物扩散，而是可以单独使用或在复合物与由组蛋白importins伴侣输送要么（约翰逊-SAL IBA 等人，2000 ; Baake 等等人，2001；Mosammaparast 等人，2001，2002a和2002b；Muhlhausser ...
|
|
|
| Self-organization Assay for Min Proteins of Escherichia coli in Micro-droplets Covered with Lipids
|
|
Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] The Min system determines the cell division plane of bacteria. As a cue of spatiotemporal regulation, the Min system uses wave propagation of MinD protein (Min wave). Therefore, the reconstitution of the Min wave in cell-sized closed space will lead to the creation of artificial cells capable of cell division. The Min waves emerge via coupling between the reactions among MinD, MinE, and ATP and the differences in diffusion rate on the cell membrane and in the cytoplasm. Because Min waves appear only under the balanced condition of the reaction-diffusion coupling, special attentions are needed towards several technical points for the reconstitution of Min waves in artificial cells. This protocol describes a technical method for stably generating Min waves in artificial cells.
[摘要] [摘要 ] Min系统确定细菌的细胞分裂平面。作为时空调节的提示，Min系统使用MinD 蛋白的波传播（Min wave）。因此，Min波在细胞大小的封闭空间中的重构将导致能够分裂细胞的人造细胞的产生。闵波出现经由耦合之间反应小号中MinD的，的MinE ，和ATP 和所述differenc ES 在细胞膜上的扩散速度和在细胞质中。因为最小波仅在反应扩散耦合的平衡条件下出现， 特别关注，需要对几个技术要点为闽波在人造细胞重建。该协议描述了一种在人造细胞中稳定产生Min波的技术方法。
[背景 ] 敏系统，它决定了细胞分ER 对称细胞分裂，是在细菌细胞内的组织系统的最显着的例子之一（Rothfield 等人，2005;和罗利特马戈林，2013年）。敏系统使用图案形成在细胞内的时间依赖性蛋白梯度的公知的作为敏波（宽松等人，2008; Halatek和Frey，2012;邦尼等人，2013; Zieske 。等人，2016 ; Kohyama 。等人， 2019 ）。Min波是由两种蛋白MinD 和MinE 的反应扩散耦合产生的。通过与ATP结合，MinD 形成二聚体并附着在膜上。的MinE 被招募到的ATP MinD的和诱导ATP酶的活性MinD的。通过MinE ，ATP- MinD 变为ADP- MinD ，并从膜上脱离。ADP- MinD的被转换回ATP- ...
|
|
|