| Method for Prolonged Incubation of Brain Slices
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Slices of neuronal tissue maintain a high degree of topographical and functional properties of neurons and glia and therefore are extensively used for measurements of neuronal activity at the molecular, cellular and network levels. However, the lifespan of slice preparations is narrow, averaging of 6-8 hours. Moreover, the average viability of brain slices varies according to animal age and region of interest, leading to the high variability and low reproducibility of recorded data.
Previous techniques to increase the viability of brain slices focused on reducing cytotoxicity by chemical means, including alterations of the artificial cerebrospinal fluid (aCSF) composition to alleviate the direct damage of the slicing procedure or adding protective antioxidants to reduce ...
[摘要] [摘要 ] 神经元组织的切片保持了神经元和神经胶质的高度地形和功能特性，因此被广泛用于在分子，细胞和网络水平上测量神经元的活性。然而，切片制剂的寿命很窄，平均为6-8小时。而且，脑切片的平均生存力会根据动物的年龄和目标区域而变化，从而导致记录数据的高变异性和低再现性。
先前增加脑切片活力的技术集中于通过化学手段降低细胞毒性，包括改变人工脑脊液（aCSF ）成分以减轻切片过程的直接损害或添加保护性抗氧化剂以减少细胞退化。在该协议中，我们将体温过低与恢复室中aCSF 条件（pH，温度和细菌水平）的牢固控制结合使用，以显着延长切片的生存能力。
考虑到其用途的广度，提高切片的生存能力和寿命可以大大提高数据的可重复性，并减少神经生理学研究中使用的动物的成本，时间和数量。
[背景 ] 神经组织切片提供基本的神经科学研究独特的优势，因为它使神经网络活动的直接调查和药理化合物对中枢神经系统的影响。因此，迫切需要为实验目的以最高质量制备和维持切片的活力。神经元切片的生存能力取决于几个内在和外在因素（Buskila 等人，2014），根据切片过程可将其分为三个阶段：切片前（切片前），切片中（切片）和切片后切片）切片程序。在切片前降低切片活力的主要因素包括局部缺血和缺氧，这是由于消除了持续供血引起的（Buskila et ...
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| Optic Nerve Crush in Mice to Study Retinal Ganglion Cell Survival and Regeneration
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] In diseases such as glaucoma, the failure of retinal ganglion cell (RGC) neurons to survive or regenerate their optic nerve axons underlies partial and, in some cases, complete vision loss. Optic nerve crush (ONC) serves as a useful model not only of traumatic optic neuropathy but also of glaucomatous injury, as it similarly induces RGC cell death and degeneration. Intravitreal injection of adeno-associated virus serotype 2 (AAV2) has been shown to specifically and efficiently transduce RGCs in vivo and has thus been proposed as an effective means of gene delivery for the treatment of glaucoma. Indeed, we and others routinely use AAV2 to study the mechanisms that promote neuroprotection and axon regeneration in RGCs following ONC. Herein, we describe a step-by-step protocol to ...
[摘要] [摘要 ] 在青光眼等疾病中，视网膜神经节细胞（RGC）神经元无法存活或无法再生视神经轴突，这是部分视力丧失的原因，在某些情况下，甚至是完全的视力丧失。视神经挤压术（ONC）不仅可以作为创伤性视神经病变的一种有用模型，而且还可以作为青光眼损伤的有用模型，因为它类似地诱导RGC细胞死亡和变性。腺相关病毒血清型2（AAV2）的玻璃体内注射已被证明特别地和有效地转导视网膜神经节细胞在体内和已因而被提出作为基因递送用于治疗青光眼的治疗的有效手段。确实，我们和其他人常规使用AAV2来研究促进ONC 后RGC中神经保护和轴突再生的机制。本文中，我们描述了分步操作的方案，以测定AAV2介导的转导和ONC损伤后小鼠中RGC的存活和再生，包括1）玻璃体内注射AAV2病毒载体，2）视神经挤压，3）霍乱毒素B （CTB）标记再生轴突，4）视神经清除，5）视网膜平面免疫染色和6）定量RGC存活和再生。除了提供执行此协议所需的所有材料和程序详细信息之外，我们还强调了它比其他相似的已发表方法的优势，并提供了有用的技巧以确保其在任何现代实验室中都能如实复制。
[背景 ] 青光眼是世界范围内不可逆失明的主要原因，其特征是视网膜神经节细胞（RGCs）逐渐退化和丧失，这是构成连接视网膜与大脑的视神经的中央投射神经元（Quigley ，2011 ; Tham ...
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