| Pancreatic Acinar Cell Preparation for Oxygen Consumption and Lactate Production Analysis
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Mitochondrial dysfunction is a principal feature of acute pancreatitis (AP) although the underlying mechanisms are still unclear. AP precipitants induce Ca2+-dependent formation of the mitochondrial permeability transition pore (MPTP) in pancreatic acinar cells (PACs), leading to ATP depletion and necrosis. Evaluations of mitochondrial bioenergetics have mainly been performed in isolated PACs using confocal microscopy, with assessment of mitochondrial membrane potential, NADH/FAD+ and ATP levels, coupled with patch-clamp electrophysiology. These studies are technically demanding and time-consuming. Application of Seahorse flux analysis now allows detailed investigations of bioenergetics changes to be performed in cell populations using a multi-well plate-reader ...
[摘要] [摘要 ] 线粒体功能障碍是急性胰腺炎（AP）的主要特征，尽管其潜在机制尚不清楚。AP沉淀剂诱导胰腺腺泡细胞（PACs）中线粒体通透性过渡孔（MPTP）的Ca 2+ 依赖性形成，导致ATP耗竭和坏死。线粒体生物能学的评估主要使用共聚焦显微镜在分离的PAC中进行，评估线粒体膜电位，NADH / FAD + 和ATP水平，以及膜片钳电生理学。这些研究在技术上既费时又费力。应用范围 海马通量分析现在允许使用多孔平板阅读器格式对细胞群体中的生物能学变化进行详细研究；耗氧率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）分别提供有关细胞呼吸和糖酵解的重要信息。诸如最大呼吸，ATP关联容量和质子泄漏等参数可以通过应用呼吸功能“压力”测试得出，该测试涉及电子传输链的药理处理。因此，使用Seahorse Flux分析提供了一种快速，方便的方法来测量详细的细胞生物能学，并使结果与其他基于平板读取器的测定法结合使用，从而更全面地了解线粒体生物能学改变的病理生理后果。
[背景 ] 线粒体功能障碍是急性胰腺炎（AP）的核心特征，急性胰腺炎是一种使人衰弱且可能致命的疾病，目前尚无针对性的治疗方法（Criddle，2016； Habtezion ...
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| Analyzing the Quenchable Iron Pool in Murine Macrophages by Flow Cytometry
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] Tissue-resident macrophages are pivotal for a tightly-regulated iron metabolism at a cellular and systemic level, since subtle iron alterations increase the susceptibility for microbial infections or drive multiple diseases. However, research on cellular iron homeostasis in macrophages remains challenging due to the limited amount of available methods using radioactive 59Fe isotopes or strong iron chelators, which might be inapplicable in certain experimental settings. This protocol describes the analysis of the quenchable iron pool (QIP) in macrophages by loading these cells with exogenous iron-complexes. Thereby, the cytoplasmic iron pool can be determined, since the iron uptake ability of macrophages inversely correlates with intracellular iron levels. Thus, this assay ...
[摘要] [摘要 ] 驻留在组织中的巨噬细胞对于在细胞和全身水平上严格调节铁代谢至关重要，因为细微的铁改变会增加对微生物感染的敏感性或引发多种疾病。然而，由于使用放射性59 Fe同位素或强铁螯合剂的可用方法数量有限，因此巨噬细胞中细胞铁稳态的研究仍然具有挑战性，这在某些实验环境中可能不适用。该协议 描述了通过向这些细胞加载外源铁配合物来分析巨噬细胞中的可淬灭铁池（QIP）。因此，由于巨噬细胞的铁摄取能力与细胞内铁水平成反比，因此可以确定细胞质的铁库。因此，该测定法能够准确分析细胞质铁通量的微小变化，并且几乎适用于所有实验室环境。另外，该方案还可以用于体外和体内的其他免疫细胞类型。
[背景 ] 由于用于全身铁代谢它们的中心调节功能，在多种组织中的巨噬细胞中迅速地改变在不同的刺激的遭遇它们的细胞内的铁水平的微生物感染和疾病（Nairz 等人，2017） 。值得注意的是，大多数细胞中的铁离子被细胞质中的主要铁存储蛋白铁蛋白结合或定位于线粒体或溶酶体等区室（Ma 等，2015 ; Soares和Hamza，2016 ...
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