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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Live cell imaging has tremendously promoted our understanding of cellular and subcellular processes such as cell division. Here, we present a step-by-step protocol for a robust and easy-to-use live cell imaging approach to study male meiosis in the plant Arabidopsis thaliana as recently established. Our method relies on the concomitant analysis of two reporter genes that highlight chromosome configurations and microtubule dynamics. In combination, these reporter genes allowed the discrimination of five cellular parameters: cell shape, microtubule array, nucleus position, nucleolus position, and chromatin condensation. These parameters can adopt different states, e.g., the nucleus position can be central or lateral. Analyzing how tightly these states are associated gives ...
[摘要] [摘要 ] 活细胞成像极大地促进了我们对细胞分裂等亚细胞过程的了解。在此，我们提出了一种循序渐进的方案，以一种可靠且易于使用的活细胞成像方法来研究雄性减数分裂。植物拟南芥。由于最近建立了我们的方法依赖于伴随分析中的两个报告基因，突出染色体构和微管动态组合，这些记者基因准许入住歧视五细胞参数：细胞形状，微管阵列，核POSITI 在，核仁位置，染色质凝聚，这些参数可以采用不同的国家，例如，该核位置可以是中央或外侧。分析如何紧密这些国家有关联产生了里程碑阶段，反过来允许定量和定性的解剖减数分裂过程我们设想，这种方法还可以为细胞分化分析提供有价值的标准 减数分裂之外的增强过程。
[背景 ] 减数分裂是一种特殊的细胞分裂周期，有两个主要目的：首先，减数分裂母细胞的DNA含量降低一半，在二倍体生物体中会导致单倍体减数分裂产物。有性繁殖的生物，以便在受精过程中融合了两个配子后，恢复了原始的基因组大小。其次，减数分裂通过亲本染色体（同源染色体或短同源）之间的DNA片段交换（称为减数分裂重组）促进了遗传多样性。通过生成新的但完整的染色体集，其中每个染色体随机存在母亲或父亲的同系物（如果是二倍体生物体）。因此，减数分裂对于不同领域的研究很有趣，从细胞生物学和生殖生物学，从遗传学到进化生物学（Wijn ker 和Schnittger ，2013； Mercier ...
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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] Intercellular communication plays a crucial role in the establishment of multicellular organisms by organizing and coordinating growth, development and defence responses. In plants, cell-to-cell communication takes place through nanometric membrane channels called plasmodesmata (PD). Understanding how PD dictate cellular connectivity greatly depends on a comprehensive knowledge of the molecular composition and the functional characterization of PD components. While proteomic and genetic approaches have been crucial to identify PD-associated proteins, in vivo fluorescence microscopy combined with fluorescent protein tagging is equally crucial to visualise the subcellular localisation of a protein of interest and gain knowledge about their dynamic behaviour. In this protocol we ...
[摘要] [摘要] 细胞间通讯通过组织和协调生长，发育和防御反应，在建立多细胞生物中起着至关重要的作用。在植物中，细胞之间的通信通过称为胞质膜（PD）的纳米膜通道进行。了解PD如何决定细胞连通性很大程度上取决于对PD成分的分子组成和功能表征的全面了解。虽然蛋白质组学和遗传学方法对于鉴定PD相关蛋白至关重要，但在体内 荧光显微镜结合荧光蛋白标记对于可视化目标蛋白的亚细胞定位并获得有关其动态行为的知识同样至关重要。在此协议中，我们详细描述了一种稳健的方法，可通过使用共聚焦显微镜通过比例荧光强度来定量定量给定蛋白质与PD的结合程度。虽然是为N 开发的。 本塔米亚纳和拟南芥，该协议可以适应其他植物物种。
[背景 ] 目前，蛋白质定位到PD通过共焦成像的确认主要基于两种不同的方法。一方面，PD周围细胞壁的分子组成不同。虽然细胞壁高度富含纤维素，但PD附近的环境中富含call质（一种β （1-3）g 卢康聚合物），可以轻松且特异地用荧光团苯胺蓝染色。这种染色显示出用作没有交叉线的PD标记的显着优势。另一方面，蛋白质组学研究已经鉴定出特定的PD蛋白并对其进行了表征（Faulkner 等人，2005; Fernandez-Calvino 等人，2011; Grison 等人，2015; Brault ...
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