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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] Intercellular communication plays a crucial role in the establishment of multicellular organisms by organizing and coordinating growth, development and defence responses. In plants, cell-to-cell communication takes place through nanometric membrane channels called plasmodesmata (PD). Understanding how PD dictate cellular connectivity greatly depends on a comprehensive knowledge of the molecular composition and the functional characterization of PD components. While proteomic and genetic approaches have been crucial to identify PD-associated proteins, in vivo fluorescence microscopy combined with fluorescent protein tagging is equally crucial to visualise the subcellular localisation of a protein of interest and gain knowledge about their dynamic behaviour. In this protocol we ...
[摘要] [摘要] 细胞间通讯通过组织和协调生长，发育和防御反应，在建立多细胞生物中起着至关重要的作用。在植物中，细胞之间的通信通过称为胞质膜（PD）的纳米膜通道进行。了解PD如何决定细胞连通性很大程度上取决于对PD成分的分子组成和功能表征的全面了解。虽然蛋白质组学和遗传学方法对于鉴定PD相关蛋白至关重要，但在体内 荧光显微镜结合荧光蛋白标记对于可视化目标蛋白的亚细胞定位并获得有关其动态行为的知识同样至关重要。在此协议中，我们详细描述了一种稳健的方法，可通过使用共聚焦显微镜通过比例荧光强度来定量定量给定蛋白质与PD的结合程度。虽然是为N 开发的。 本塔米亚纳和拟南芥，该协议可以适应其他植物物种。
[背景 ] 目前，蛋白质定位到PD通过共焦成像的确认主要基于两种不同的方法。一方面，PD周围细胞壁的分子组成不同。虽然细胞壁高度富含纤维素，但PD附近的环境中富含call质（一种β （1-3）g 卢康聚合物），可以轻松且特异地用荧光团苯胺蓝染色。这种染色显示出用作没有交叉线的PD标记的显着优势。另一方面，蛋白质组学研究已经鉴定出特定的PD蛋白并对其进行了表征（Faulkner 等人，2005; Fernandez-Calvino 等人，2011; Grison 等人，2015; Brault ...
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