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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] The yeast Saccharomyces cerevisiae has been perceived over decades as a highly valuable model organism for the investigation of ion homeostasis. Indeed, many of the genes and biological systems that function in yeast ion homeostasis are conserved throughout unicellular eukaryotes to humans. In this context, measurement of the yeast cellular ionic content provides information regarding yeast response to gene deletion or exposure to chemicals for instance. We propose here a protocol that we tested for the analysis of 12 elements (Ba2+, Ca2+, Cd2+, Co2+, Cu2+, Fe2+, K+, Mg2+, Mn2+, Na+, Ni2+, Zn2+) in yeast using Inductively Coupled Plasma-Atomic ...
[摘要] [摘要] 酵母酿酒酵母已被感知了几十年，作为离子稳态的调查一个非常有价值的模型生物。实际上，在整个酵母的单细胞真核生物中，在酵母离子稳态中起作用的许多基因和生物系统都是保守的。在这种情况下，酵母细胞离子含量的测量提供了有关酵母对例如基因缺失或暴露于化学物质的反应的信息。我们在这里提出一种测试过的协议，用于分析12种元素（Ba 2 + ，Ca 2 + ，Cd 2 + ，Co 2 + ，Cu 2 + ，Fe 2 + ，K 2 + ，Mg 电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）测定酵母中的2 + ，Mn 2 + ，Na + ，Ni 2 + ，Zn 2+ ）。这项技术能够确定一个生物样品中许多离子的细胞含量。
[背景 ] 酵母已被广泛用于研究基因缺失，细胞外环境的修改，或异源蛋白的生产，例如后的离子响应。在这种情况下，具有监测酵母细胞离子状态的方法是非常重要的。ICP-AES使用来自惰性气体（如氩气）的高能等离子体非常快速地燃烧分析物。从分析物发出的颜色表示存在的元素，光谱信号的强度表示这些元素的浓度。与其他技术（例如分光光度法，原子吸收光谱法和原子荧光光谱法）相比，ICP-AES是一种多离子分析方法，涉及简单且快速的过程，且检测限相对较低（Dahlquist和Knoll，1978年）。此处描述的方法适用于Ba 2 + ，Ca 2 + ，Cd 2 + ...
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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] Superoxide dismutases (SODs) act as a primary defence against reactive oxygen species (ROS) by converting superoxide anion radicals (O2-) into molecular oxygen (O2) and hydrogen peroxide (H2O2). Members of this enzyme family include CuZnSODs, MnSODs, FeSODs, and NiSODs, depending on the nature of the cofactor that is required for proper activity. Most eukaryotes, including yeast, possess CuZnSOD and MnSOD. This protocol aims at assessing the activity of the yeast Saccharomyces cerevisiae MnSOD Sod2p from cellular extracts using nitroblue tetrazolium staining. This method can be used to estimate the cellular bioavailability of Mn2+ as well as to evaluate the redox state of the cell.
[摘要] [摘要 ] 超氧化物歧化酶（SOD能）充当主防御针对反应性氧物质（ROS）通过转换的超氧阴离子自由基（O 2 - ）为分子氧（O 2 ）和过氧化氢（H 2 ? 2 ）。这种酶的家庭成员包括CuZnSODs ，MnSODs ，FeSODs 和NiSODs ，这取决于是需要适当的活动辅助因子的性质。大多数真核生物，包括酵母，都具有CuZnSOD 和MnSOD 。该协议旨在评估酵母的活性 使用硝基蓝四唑染色法从细胞提取物中提取酿酒酵母MnSOD Sod2p 。该方法可用于估计Mn 2+ 的细胞生物利用度以及评估细胞的氧化还原状态。
[背景 ] 的SODs被定义为减少正常有氧代谢为氧气和过氧化氢期间形成的氧的有害自由基含金属的抗氧化剂酶。：这些酶是基于需要作为辅因子进行适当的酶活性的金属分类CuZnSODs ，MnSODs ，FeSODs ，和NiSODs 。在酿酒酵母中，有两个S OD ：CuZn-Sod1p和Mn-Sod2p（Abreu和Cabelli ...
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