| Quantification of Bacteria Residing in Caenorhabditis elegans Intestine
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Quantification of intestinal colonization by pathogenic or commensal bacteria constitute a critical part of the analysis to understand host-microbe interactions during different time points of their interplay. Here we detail a method to isolate non-pathogenic and pathogenic bacteria from C. elegans intestines, and classify gut phenotypes induced by bacterial pathogens using fluorescently-tagged bacteria. Furthermore, these methods can be used to isolate and identify new culturable bacterial species from natural microbiomes of wild nematodes.
[摘要] [ 摘要] 量化中肠道定植通过致病或者共生细菌构成一个关键部分中的分析要了解主机微生物相互作用在不同的时间点中他们的相互作用。在这里我们详细介绍一个方法要隔离非致病性和致病性细菌从C. 线虫 肠，而且分类肠表型诱导由细菌病原体使用荧光标记的细菌。此外，这些方法可以被用于为了隔离和识别新的可培养的细菌种类从天然微生物组中野生线虫。
[ 背景] 在该野生，线虫是否暴露为一宽品种中细菌和真菌群落（Frezal 而菲利克斯，2015年）。在实验室条件下，该线虫C. 线虫已被历史维护在一个单一食物源（布伦纳，1974年）。^ h H但是，该蠕虫被冲击下随着各种致病菌和一个增加数中的非- 病原细菌中多样化的营养质量（Garsin 的Et 铝，。2003 ; Gracida 而Eckmann，2013 ; 德克森的Et 铝，。2016 ; 麦克尼尔的Et 铝。，2013 ; 谭的Et 铝，1999年）。C. 线虫胚胎能要提取从妊娠雌雄同体通过使用次氯酸钠处理。这个过程省去细菌允许的新世代要被暴露游记要一个微生物吨。他的优势提供了一个独特的框架为了研究宿主与微生物相互作用。遗传易处理中的线虫和细菌允许为了研究真核生物（Garsin 的Et 铝，2003）和原核（加拉格尔和Manoil，2001）基因功能在不同的时间点在这个动态 相互作用。
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| Generation of Chemically Induced Liver Progenitors (CLiPs) from Rat Adult Hepatocytes
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] Primary mature hepatocytes (MHs) or their progenitor cells are candidate cell sources for cell transplantation therapy in severe liver diseases. However, stable culture of these cells or generation of equivalent cells from pluripotent stem cells has been limited. Using a cocktail of small molecules that we previously found useful in stable culture of multiple types of stem/progenitor cells, we recently established a novel method to generate bipotent liver progenitor cells, named chemically induced liver progenitors (CLiPs), from adult rat MHs. Here, we describe a detailed protocol for the induction of rat CLiPs. We first describe the method to isolate primary rat MHs and then describe how to induce CLiPs from these MHs. In addition, we describe a method to evaluate the bipotentiality of ...
[摘要] 原代成熟肝细胞（MH）或其祖细胞是重症肝病中细胞移植治疗的候选细胞来源。然而，这些细胞的稳定培养或多能干细胞的等效细胞的产生受到限制。我们使用先前在多种类型的干/祖细胞稳定培养中发现有用的小分子混合物，最近建立了一种从成年大鼠MHs产生双能肝脏祖细胞（命名为化学诱导肝祖细胞（CLiPs））的新方法。在这里，我们描述了诱导大鼠CLiPs的详细方案。我们首先描述分离原代鼠MH的方法，然后描述如何从这些MH中诱导CLiPs。另外，我们描述了一种评估产生的CLiPs分化成肝细胞和胆管上皮细胞的双能性的方法。我们还介绍了如何通过长期的文化和详细的示例数据建立稳定的CLiP。可以在2周内产生初级CLiPs，并且可以在2.5-4个月内建立经历10次传代的稳定的CLiPs，批次间变异性。
【背景】对于实现肝病再生医学的新型细胞来源有着强烈的需求。目前唯一的治疗终末期肝病的方法是肝移植，但是由于供者短缺，其应用受到限制。最近，我们小组提出了一种产生能够在体外稳定地扩增的新型LPC的方法，并且可以以广泛的效率重新繁殖慢性肝炎动物模型的损伤肝脏（Katsuda等人， / ...
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| Isolation of Primary Human Skeletal Muscle Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Primary myoblast culture is a valuable tool in research of muscle disease, pathophysiology, and pharmacology. This protocol describes techniques for dissociation of cells from human skeletal muscle biopsies and enrichment for a highly myogenic population by fluorescence-activated cell sorting (FACS). We also describe methods for assessing myogenicity and population expansion for subsequent in vitro study.
[摘要] 原代成肌细胞培养是研究肌肉疾病，病理生理学和药理学的有用工具。 该协议描述了通过荧光激活细胞分选（FACS）从人类骨骼肌活检中分离细胞并富集高度肌原细胞的技术。 我们还描述了用于评估随后的体外研究中肌原性和群体扩张的方法。
【背景】来自肌肉活组织检查的原代人成肌细胞是模拟体外人体肌肉疾病的有价值的资源。成肌细胞增殖，分化和融合的改变是许多神经肌肉疾病所共有的特征，并且可以用于测定基于细胞的和药理学的治疗。人类骨骼肌活组织检查，尤其是那些受疾病影响的人，通常含有大量的非肌原细胞，如脂肪细胞和成纤维细胞。因此，纯化肌原细胞进行骨骼肌发育和疾病的体外研究是非常重要的。肌肉疾病的早期研究涉及使用组织外植体或未纯化的分离细胞（Geiger和Garvin，1957; Herrmann等人，1960; Goyle等人，1967; Bishop 1971年），后来，Blau和Webster引入了一种预先电镀技术去除成纤维细胞（Blau and ...
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