| BMV Propagation, Extraction and Purification Using Chromatographic Methods
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Brome mosaic virus (BMV) is a well-known plant virus representing single-stranded RNA (ssRNA) positive-sense viruses. It has been widely used as a model in multiple studies concerning plant virus biology, epidemiology and the application of viral capsids in nanotechnology. Herein, we describe a method for BMV purification based on ion-exchange and size-exclusion chromatography. The presented method is of similar efficiency to previously described protocols relying on differential centrifugation and can easily be scaled up. The resulting BMV capsids are stable and monodisperse and can be used for further applications.
[摘要] 雀麦花叶病毒（BMV）是众所周知的植物病毒，代表单链RNA（ssRNA）正义病毒。 它已被广泛用作植物病毒生物学，流行病学和病毒衣壳在纳米技术中的应用的多项研究中的模型。 在本文中，我们描述了基于离子交换和尺寸排阻色谱的BMV纯化方法。 所提出的方法与先前描述的依赖于差速离心的方案具有相似的效率，并且可以容易地按比例放大。 得到的BMV衣壳是稳定的并且是单分散的，并且可以用于进一步的应用。
【背景】纳米技术要克服的关键挑战之一是制定有效的和组织特异性的药物递送方法。植物病毒和病毒样颗粒（VLP）具有生物相容性和可生物降解性，不含对人类或动物健康有害的病原体，是合成药物载体的安全替代品，通常会激活免疫系统的不良反应或积聚在免疫系统中。身体到毒性水平。最后，病毒衣壳的生产相对便宜且快速（Ren et al。，2007; Arcangeli et al。，2014）。
Bromoviridae 家族的雀麦花叶病毒（BMV）是用作纳米颗粒载体的良好候选物，因为它显示出所有上述特征并且是研究最多的植物病毒之一（Figlerowicz，2000; Alejska et al。，2005; Urbanowicz et al。，2005; Wierzchoslawski et al。，2006; Kao vet al。 ...
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| Glycogen and Extracellular Glucose Estimation from Cyanobacteria Synechocystis sp. PCC 6803
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Cyanobacteria, which have the extraordinary ability to grow using sunlight and carbon dioxide, are emerging as a green host to produce value-added products. Exploitation of this highly promising host to make products may depend on the ability to modulate the glucose metabolic pathway; it is the key metabolic pathway that generates intermediates that feed many industrially important pathways. Thus, before cyanobacteria can be considered as a leading source to produce value-added products, we must understand the interaction between glucose metabolism and other important cellular activities such as photosynthesis and chlorophyll metabolism. Here we describe reproducible and reliable methods for measuring extracellular glucose and glycogen levels from cyanobacteria.
[摘要] 具有使用阳光和二氧化碳生长的非凡能力的蓝细菌正在成为生产高附加值产品的绿色主机。 利用这种非常有希望的宿主来制造产品可能取决于调节葡萄糖代谢途径的能力; 它是产生中间产物的关键代谢途径，这些中间产物为许多工业上重要的途径提供了饲料。 因此，在蓝藻被认为是生产增值产品的主要来源之前，我们必须了解葡萄糖代谢与其他重要细胞活动如光合作用和叶绿素代谢之间的相互作用。 在这里我们描述了测量蓝细菌细胞外葡萄糖和糖原水平的可重复和可靠的方法。
【背景】蓝藻在自然栖息地有一个明暗周期。有鉴于此，他们的新陈代谢主要集中在光合作用，卡尔文循环，糖酵解和TCA循环中，同时进行N-同化;碳以糖原形式储存。在黑暗中，糖原通过糖酵解和氧化磷酸戊糖（OPP）途径，TCA循环的氧化和还原分支以及C4循环代谢（Nagarajan et al。，2014）。因此，从黑暗转变为光照或光照转变为黑暗推动了代谢重新编程。
在实验室中，向培养基中添加葡萄糖也会影响蓝藻的代谢程序。例如，营养和环境条件影响蓝藻集胞藻如何代谢葡萄糖;在光合自养，异养和混合营养条件下，集胞藻代谢葡萄糖的方式不同。先前的研究报道，一些菌株的集胞藻是轻度依赖的并且耐受葡萄糖（Anderson和McIntosh，1991）。光激活异养生长（LAHG）条件的特征在于存在葡萄糖并且在黑暗中用白光或蓝光脉冲生长至少5-15分钟/天。然而，一些集胞蓝细菌葡萄糖不耐受，这意味着它们在黑暗中不能生长在葡萄糖存在下。总之，已经报道在集胞藻的培养基中加入葡萄糖会带来生理和代谢变化，如色素沉着（Ryu等人，2004），碳代谢（Lee等人，2007; ...
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| Host-regulated Hepatitis B Virus Capsid Assembly in a Mammalian Cell-free System
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] The hepatitis B virus (HBV) is an important global human pathogen and represents a major cause of hepatitis, liver cirrhosis and liver cancer. The HBV capsid is composed of multiple copies of a single viral protein, the capsid or core protein (HBc), plays multiple roles in the viral life cycle, and has emerged recently as a major target for developing antiviral therapies against HBV infection. Although several systems have been developed to study HBV capsid assembly, including heterologous overexpression systems like bacteria and insect cells, in vitro assembly using purified protein, and mammalian cell culture systems, the requirement for non-physiological concentrations of HBc and salts and the difficulty in manipulating host regulators of assembly presents major limitations ...
[摘要] 乙型肝炎病毒（HBV）是一种重要的全球人类病原体，并且是肝炎，肝硬化和肝癌的主要原因。 HBV衣壳由单个病毒蛋白的多个拷贝组成，衣壳或核心蛋白（HBc）在病毒生命周期中起着多重作用，并且最近已经成为开发抗HBV病毒疗法的主要靶标。尽管已经开发了几种用于研究HBV衣壳组装的系统，包括异源过表达系统如细菌和昆虫细胞，使用纯化蛋白质和哺乳动物细胞培养系统进行体外组装，但对非生理浓度HBc和盐以及难以操纵装配的宿主调节物在生理相关条件下的衣壳装配的详细研究方面存在主要限制。我们最近开发了基于兔网织红细胞裂解物（RRL）的哺乳动物无细胞系统，其中HBc以生理浓度表达并在近生理条件下组装成衣壳。该系统已经揭示了HBc装配要求，这是以前装配系统所不能预料的。此外，该系统中的衣壳组装受可容易操作的内源宿主因子调控。在这里，我们提供了这种无细胞衣壳装配系统的详细协议，包括如何操纵调节装配的宿主因子的说明。
【背景】乙型肝炎病毒（HBV）是一种重要的全球人类病原体，其长期感染全世界数以亿计的人并且代表病毒性肝炎，肝硬化和肝癌的主要原因（Seeger等人， 2013; Trepo et。，2014）。 HBV通过逆转录RNA中间体（所谓的前基因组RNA（pgRNA））在核衣壳内（NC）复制其基因组DNA（一种宽松的环状部分双链DNA（RC ...
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