| Immuno-electrophysiology on Neuromuscular Junctions of Drosophila Third Instar Larva
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Alterations in synaptic transmission are critical early events in neuromuscular disorders. However, reliable methodologies to analyze the functional organization of the neuromuscular synapses are still needed. This manuscript provides a detailed protocol to analyze the molecular assembly of the neuromuscular synapses through immune-electrophysiology in Drosophila melanogaster. This technique allows the quantification of the molecular behavior of the neuromuscular synapses by correlating the structural configuration of the synaptic boutons with their electrical activity.
[摘要] [摘要]突触传递的改变是神经肌肉疾病的关键早期事件。但是，仍然需要可靠的方法来分析神经肌肉突触的功能组织。此马努脚本提供了详细的协议，通过在免疫电分析神经肌肉突触的分子组装果蝇黑腹果蝇。该技术通过使突触钮扣的结构构型与其电活动相关联，可以量化神经肌肉突触的分子行为。
[背景]果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头（NMJ）的功能组织在研究突触形成和功能的分子机制方面具有突出的优势（Feiguin等，2009 ; Godena等，2011; Romano等。（2014年和2015年；Strah等人，2020年），它在包括人类在内的其他物种中似乎是保守的。在这方面，果蝇NMJs的解剖组织是由多个突触钮扣构成的，这些突触钮扣是在运动轴突的最终乔木形成的。这些结构的分化和维持负责骨骼肌的神经支配，并暗示不同分子的协调作用，专门用于建立细胞接触以及释放，接收和整合神经递质信号传导所需的机制。此外，在果蝇中开发的功能强大的遗传工具以及神经系统对单个神经元的解剖学解析，提供了难得的机会，可以在可区分细胞的组织中进行全基因组范围的分子表型无偏搜索。尽管果蝇已经存在可视化神经肌肉突触建立的单独协议（Sabeva和Bykhovskaia，2017 ; Goel等人，2019 ...
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| Bacterial Lawn Avoidance and Bacterial Two Choice Preference Assays in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Physical avoidance of pathogens is a crucial defense strategy used by the host to reduce pathogen infection. Hosts display the use of multiple strategies to sense and avoid pathogens, ranging from olfaction to sensing of damage caused by pathogen infection. Understanding various mechanisms of pathogen avoidance has the potential to uncover conserved host defense responses that are important against pathogen infections. Here, we describe protocols for studying pathogen lawn avoidance behavior as well as a change of bacterial preferences in the model nematode Caenorhabditis elegans. Besides, we describe the protocol for measuring preferences for pathogenic and nonpathogenic bacteria after training of the animals on pathogenic bacteria. These assays can be implemented in ...
[摘要] [摘要 ] 物理避免病原体是宿主减少病原体感染的关键防御策略。主持人展示了使用多种策略来感知和避免病原体，从嗅觉到感知由病原体感染引起的损害。了解避免病原体的各种机制有可能揭示保守的宿主防御反应，这些反应对病原体感染很重要。在这里，我们描述协议研究线虫秀丽隐杆线虫模型中的病原体避免草坪行为以及细菌偏好的变化的协议 。此外，我们描述了在病原菌上对动物进行训练后测量病原性和非病原性细菌偏好的协议。这些测定法可用于发现宿主学习的各种机制，从而避免病原体。
[背景 ] 一种宿主使用多个策略来抵御病原体感染（Medzhitov 等人，2012）。物理规避病原体是宿主使用的各种防御策略之一（Medzhitov 等，2012；Kavaliers 等，2019； Singh和Aballay ，2020）。在检测到细菌毒素后，不同的感觉机制（包括化学感受和伤害感受神经元引起的疼痛诱发）会导致回避行为。对导致病原体回避的机制的更深入了解，有可能揭示保守的宿主防御反应，这些反应对病原体感染很重要。
线虫秀丽隐杆线虫已被广泛用于理解病原体回避行为和相关学习。秀丽隐杆线虫似乎使用多种机制来了解导致逃避行为的诱因的病原体（Singh和Aballay ，2020年）。秀丽隐杆线虫可以感知细菌代谢产物（Tran 等，2017）以及核心细胞活动的扰动（Melo ...
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| Nuclear/Cytoplasmic Fractionation of Proteins from Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] C. elegans is widely used to investigate biological processes related to health and disease. To study protein localization, fluorescently-tagged proteins can be used in vivo or immunohistochemistry can be performed in whole worms. Here, we describe a technique to localize a protein of interest at a subcellular level in C. elegans lysates, which can give insight into the location, function and/or toxicity of proteins.
[摘要] ℃。 线虫>广泛用于研究与健康和疾病相关的生物过程。 为了研究蛋白质定位，荧光标记的蛋白质可用于体内>或免疫组织化学可在整个蠕虫中进行。 在这里，我们描述了一种在 C中亚细胞水平定位感兴趣的蛋白质的技术。 线虫>裂解物，可以洞察蛋白质的位置，功能和/或毒性。
【背景】亚细胞分级已用于不同的模式生物中以鉴定和研究细胞核，细胞膜和细胞质中的蛋白质功能。 例如，当聚集倾向蛋白定位于细胞核或细胞质中时，它们的毒性可能更大（Kontopoulos et al。>，2006; Barmada et al。>，2010）。 在这里，我们提供了一个协议（改编自Chen et al。>，2000和La Rocca et al。>，2007）来定位的细胞核和细胞质组分中的特定蛋白质。>℃。线虫>。
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