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Date:
2018-10-20
[Abstract] Phytophthora sojae, the causal agent of soybean root and stem rot, is responsible for enormous economic losses in soybean production. P. sojae secrets various effectors to reprogram host immunity. The plant apoplastic space is a major battleground in plant-pathogen interactions. Here we describe a protocol for purification and isolation of secreted proteins from P. sojae, including precipitation of secreted proteins from P. sojae culture filtrate, chromatographic purification of the secreted proteins and analysis of the proteins by Mass spectrometry. With this protocol, it will be easier to identify potential apoplastic effectors in Phytophthora and will benefit our understanding of plant-microbe interactions.
[摘要] 大豆根和茎腐病的致病因子大豆疫霉（Phytophthora sojae）是造成大豆生产的巨大经济损失的原因。 P上。 sojae >秘密各种效应器重新编程宿主免疫力。植物质外体空间是植物 - 病原体相互作用的主要战场。在这里，我们描述了从 P中纯化和分离分泌蛋白的方案。 sojae >，包括来自 P的分泌蛋白的沉淀。 sojae >培养滤液，分泌蛋白的色谱纯化和质谱分析蛋白质。通过该协议，可以更容易地鉴定 Phytophthora >中潜在的质外体效应物，并有助于我们对植物 - 微生物相互作用的理解。
【背景】从 Phytophthora >物种中分泌的蛋白质的纯化对于理解 Phytophthora >发病机理至关重要。过去，V8果汁和植物（番茄和利马豆）果汁培养基已用于培养 Phytophthora >，培养物过滤后用于分析 Phytophthora >分泌的蛋白质。这些方案的缺点是培养基含有大量的植物蛋白，它们代表了大部分检测到的蛋白质。在该方案中，我们使用了不含任何蛋白质的合成液体培养基。该培养基显着降低了 Phytophthora >培养滤液的背景。此外，利用凝胶过滤脱盐和筛分柱代替离子交换柱，可以有效和大规模纯化 Phytophthora >分泌的蛋白质。
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