| Immunoprecipitation of Acetyl-lysine and Western Blotting of Long-chain acyl-CoA Dehydrogenases and Beta-hydroxyacyl-CoA Dehydrogenase in Palmitic Acid Treated Human Renal Tubular Epithelial Cells
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] As one of the main energy metabolism organs, kidney has been proved to have high energy requirements and are more inclined to fatty acid metabolism as the main energy source. Long-chain acyl-CoA dehydrogenases (LCAD) and beta-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase (beta-HAD), key enzymes involved in fatty acid oxidation, has been identified as the substrate of acetyltransferase GCN5L1 and deacetylase Sirt3. Acetylation levels of LCAD and beta-HAD regulate its enzymes activity and thus affect fatty acid oxidation rate. Moreover, immunoprecipitation is a key assay for the detection of LCAD and beta-HAD acetylation levels. Here we describe a protocol of immunoprecipitation of acetyl-lysine and western blotting of LCAD and beta-HAD in palmitic acid treated HK-2 cells (human renal tubular epithelial ...
[摘要] [摘要] 甲作为肾脏的主要能量代谢器官之一，肾脏已被证明具有很高的能量需求，并且更倾向于将脂肪酸代谢为主要能量来源。 长链酰基辅酶A脱氢酶（LCAD）和Beta-羟酰基 -CoA脱氢酶（β-HAD），涉及的关键酶脂肪酸氧化，已被确定为乙酰转移酶GCN5L1和脱乙酰酶Sirt3的底物。 LCAD和β-HAD的乙酰化水平调节其酶的活性，从而影响脂肪酸的氧化速率。 此外，免疫沉淀是检测LCAD和β-HAD乙酰化水平的关键方法。在这里，我们描述了在棕榈酸处理的HK-2细胞（人肾小管上皮细胞）中乙酰赖氨酸的免疫沉淀以及LCAD和β-HAD的免疫印迹实验。 该方案为读者提供了清晰的步骤，因此该方法可用于检测各种蛋白质的乙酰化水平。
[背景 ] 翻译后修饰（PT Ms）使细胞具有高度动态的机制来调节细胞途径（Zhao 等，2010）。 乙酰化已成为主要的翻译后蛋白质修饰之一。越来越多的证据小号指示乙酰化对手磷酸化的线粒体调控修改（Henriksen的等人，2012） 。 过线粒体蛋白质的60％被乙酰化，作为声明，这是参与能量代谢例如三羧酸（TCA）循环，氧化磷酸化（OXPHOS），脂肪酸氧化和氨基酸代谢（Hirschey 等人，2010 ; ...
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| Rice Ragged Stunt Virus Propagation and Infection on Rice Plants
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] Virus inoculation is a basic experimental procedure to evaluate the resistance of a rice variety or a transgenic material upon virus infection. We recently demonstrated that Rice Ragged Stunt Virus (RRSV), an oryzavirus that is transmitted by brown planthopper (BPH), can suppress jasmonic acid-mediated antiviral defense through the induction of microRNA319 and facilitate virus infection in rice. To verify this, we performed virus inoculation experiments on wild-type rice plants and miR319-TCP21-associated transgenic rice plants through a modified group inoculation method. Here, we presented the detailed procedure of RRSV propagation and infection process on rice plants.
[摘要] 病毒接种是评估水稻品种或转基因材料对病毒感染的抗性的基本实验程序。 我们最近证明，由褐飞虱（BPH）传播的 Rice Ragged Stunt Virus >（RRSV）是一种 oryzavirus >，可以通过诱导抑制茉莉酸介导的抗病毒防御 microRNA319并促进水稻中的病毒感染。 为了验证这一点，我们通过改良的组接种方法对野生型水稻植物和miR319-TCP21相关的转基因水稻植物进行了病毒接种实验。 在这里，我们介绍了水稻植物RRSV繁殖和感染过程的详细程序。
【背景】研究病毒发病机制和筛选抗病毒水稻品种已经在克服水稻病毒病和保持粮食安全方面做了大量工作。 在该领域中，病毒接种是评估转基因材料或水稻品种的抗性的必要且可靠的方法。 水稻粗糙特技病毒>（RRSV）可以在许多亚洲国家以持续繁殖的方式通过褐飞虱传播水稻褴褛特技病（Ling et al。>，1978; Hibino，1979）。 两种经典方法，包括单苗接种和组接种，已用于进行病毒接种实验（Zhang et al。>，2013）。 通过修改传统的群体接种方法，我们提供了一种与自然感染条件非常相似的便捷方法。
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| CRISPR/Cas9-mediated ssDNA Recombineering in Corynebacterium glutamicum
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Corynebacterium glutamicum is a versatile workhorse for industrial bioproduction of many kinds of chemicals and fuels, notably amino acids. Development of advanced genetic engineering tools is urgently demanded for systems metabolic engineering of C. glutamicum. Recently unveiled clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) and their CRISPR-associated proteins (Cas) are now revolutionizing genome editing. The CRISPR/Cas9 system from Streptococcus pyogenes that utilizes NGG as protospacer adjacent motif (PAM) and has good targeting specificity can be developed into a powerful tool for efficient and precise genome editing of C. glutamicum. In this protocol, we described the general procedure for CRISPR/Cas9-mediated ssDNA ...
[摘要] 谷氨酸棒杆菌是多种化学品和燃料，特别是氨基酸的工业生物生产的多功能工具。 迫切需要开发先进的基因工程工具用于 C的系统代谢工程。谷氨酸。 最近推出的聚集的有规律的间隔短回文重复序列（CRISPR）和它们的CRISPR相关蛋白（Cas）现在正在彻底改变基因组编辑。 来自 Streptococcus pyogenes 的CRISPR / Cas9系统利用NGG作为原型间隔区相邻基序（PAM）并具有良好的靶向特异性，可以开发成为 C的高效和精确基因组编辑的有力工具。谷氨酸。 在该方案中，我们描述了 C中CRISPR / Cas9介导的ssDNA重组工程的一般程序。谷氨酸。 可以在 C中引入小的修改。 谷氨酸染色体，编辑效率高达90％。
【背景】革兰氏阳性土壤细菌 Corynebacterium glutamicum 是用于氨基酸，生物燃料和聚合物构建模块的工业生物生产的多功能工具（Becker et al。，2016）。在 C工程的早期阶段。谷氨酸，随机诱变结合对氨基酸类似物的表型抗性的阳性选择是最常用的策略（Vertes et al。，2005）。 C中的遗传操作。谷氨酸（glutamicum）于1984年启动，并成为菌株改良的关键促成策略（Ozaki et al。，1984）。常规使用的基因破坏和插入 ...
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