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Date:
2018-11-20
[Abstract] Dysfunction of the microtubule-associated protein Tau (encoded by the MAPT gene) has been implicated in more than twenty neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s. As such, the physiological and disease-relevant functions of Tau have garnered great interest in the research community. One barrier hampering investigations into the functions of Tau and the generation of pharmacological agents targeting Tau has been the difficulty of obtaining soluble Tau protein in purified form. Here, we describe a protocol that uses dual affinity tag purification to selectively purify soluble recombinant Tau protein from bacteria that is functionally active for downstream applications including immunization, microtubule binding assays, and protein-protein interaction studies.
[摘要] 微管相关蛋白Tau（由 MAPT 基因编码）的功能障碍已经涉及20多种神经退行性疾病，包括阿尔茨海默病。 因此，Tau的生理和疾病相关功能引起了研究界的极大兴趣。 妨碍对Tau功能的研究和产生靶向Tau的药理学试剂的一个障碍是难以获得纯化形式的可溶性Tau蛋白。 在这里，我们描述了一种方案，该方案使用双亲和标签纯化从细菌中选择性纯化可溶性重组Tau蛋白，所述细菌对于下游应用具有功能活性，包括免疫，微管结合测定和蛋白质 - 蛋白质相互作用研究。
【背景】Tau传统上被定义为微管结合蛋白;然而，在人类疾病中，Tau可以与轴突微管分离并错误定位到其他神经元区室，包括体细胞，树突和突触，其中与非微管蛋白和结构的相互作用驱动神经元功能障碍（Iqbal et al。 ，2016; Wang和Mandelkow，2016; Zhou et al。，2017; McInnes et al。，2018）。尽管神经原纤维缠结形式的Tau聚集体通常存在于死后患病的脑组织中，但研究表明，可溶性Tau，而不是聚集的Tau，是神经元功能障碍的主要原因（Crimins et al。，2012 ; Polydoro et al。，2014; Koss et al。，2016）。因此，研究Tau在疾病中的可溶性功能，例如鉴定蛋白质 - ...
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