| Isolation of Murine Primary Aortic Smooth Muscle Cells
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Vascular smooth muscle cells (VSMCs) have been cultured for decades to study the role of these cells in cardiovascular disorders. The most common source of VSMCs is the rat aorta. Here we show the adaptation of this method to isolate and culture mouse aortic VSMCs. The advantage of this method is that there are many more transgenic mouse lines available compared to rats. The protocol consists of the isolation of the aorta, the liberation of vascular cells by the action of collagenase, culturing of VSCMs, and analyzing filamentous actin and alpha smooth muscle actin by fluorescence microscopy. VSCMs can be further used to study mechanisms underlying cardiovascular diseases.
Graphic abstract
Figure 1. Working steps ...
[摘要] [摘要]血管平滑肌细胞（VSMC）已培养了数十年，以研究这些细胞在心血管疾病中的作用。VSMC的最常见来源是大鼠主动脉。在这里，我们展示了此方法对分离和培养小鼠主动脉VSMC的适应性。这种方法的优点是，与大鼠相比，有更多的转基因小鼠系可用。该方案包括主动脉的分离，通过胶原酶的作用释放血管细胞，培养VSCM ，通过荧光显微镜分析丝状肌动蛋白和α平滑肌肌动蛋白。VSCM可进一步用于研究心血管疾病的潜在机制。
图形摘要：
˚F igure 1.工作步骤
关键词：血管平滑肌细胞鼠主动脉提取分离培养
[背景]血管壁细胞（壁细胞）在多种疾病的调节中起着至关重要的作用，从高血压（Rodríguez-Vita等，2005a）和动脉粥样硬化（Rodríguez-Vita等，2008）到癌症（ Wong等人，2020年），甚至最近还有COVID-19 （He等人，2020年）。毛细血管大部分被周细胞覆盖，而较大的血管在血管壁中含有VSCM。壁细胞通过血管收缩和血管舒张来控制血流。这样，吨哎是在几种药物靶，其降低血压（圣保罗等人，2020） ...
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| Human Endothelial Cell Spheroid-based Sprouting Angiogenesis Assay in Collagen
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Angiogenesis, the formation of new blood vessels from pre-existing ones plays an important role during organ development, regeneration and tumor progression. The spheroid-based sprouting assay is a well-established and robust method to study the influence of genetic alterations or pharmacological compounds on capillary-like tube formation of primary cultured endothelial cells. A major advantage of this assay is the possibility to study angiogenesis in a 3D environment. Endothelial cells are cultured as hanging drops to form spheroids. Those spheroids are embedded into a collagen matrix and tube formation is analyzed 24 h later. By analyzing sprout number and sprout length the effects of genetic manipulation or drug treatment on angiogenesis can be investigated.
[摘要] 血管生成，从先前存在的血管形成新血管在器官发育，再生和肿瘤进展中起重要作用。 基于球体的发芽测定法是一种成熟且稳健的方法，用于研究遗传改变或药理学化合物对原代培养的内皮细胞的毛细血管样管形成的影响。 该测定的主要优点是可以在3D环境中研究血管生成。 将内皮细胞培养为悬滴以形成球状体。 将这些球状体嵌入胶原基质中，24小时后分析管形成。 通过分析发芽数和发芽长度，可以研究遗传操作或药物治疗对血管生成的影响。
【背景】血管为器官提供氧气和营养。在不再满足局部需求的情况下，细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）以诱导新血管的形成。新的容器芽由一个由茎细胞牵引的前端细胞组成（Potente和Makinen，2017）。血管生成在生理条件下（例如，肌肉和脂肪组织的生长）以及病理条件（例如，伤口愈合，黄斑变性和肿瘤生长）发生。因此，非常需要破译协调血管生成的基本机制并测试干扰病理性血管生成的化合物。
基于球体的发芽试验由Thomas Korff博士和Hellmut Augustin博士在90年代后期开发（Korff和Augustin，1999），使研究人员能够快速研究药物或基因操作对发芽血管生成的影响。稳健的方式（Heiss et al。，2015）。基于球体的发芽测定的一个重要优点是分析3D环境中的芽形成。这促进内皮细胞之间的细胞 - ...
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