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Date:
2018-09-05
[Abstract] There exists a wide variety of techniques to isolate and purify viral particles from cell culture supernatants. However, these techniques vary greatly in ease of use, purity, yield and impact on viral structural integrity. Most importantly, it is becoming evident that secreted extracellular vesicles (EVs) co-purify with retroviruses using nearly all purification methods due to nearly indistinguishable biophysical characteristics such as size, buoyant density and nucleic acid content. Recently, our group has illustrated a means of isolating intact and highly enriched retroviral virions from EV-containing cell supernatants using an immunoprecipitation approach targeting the viral envelope glycoprotein of the Moloney Murine Leukemia Virus (Renner et al., 2018). This technique, that ...
[摘要] 存在多种从细胞培养上清液中分离和纯化病毒颗粒的技术。然而，这些技术在易用性，纯度，产量和对病毒结构完整性的影响方面差异很大。最重要的是，由于几乎无法区分的生物物理特征，例如大小，浮力密度和核酸含量，使用几乎所有纯化方法分泌的细胞外囊泡（EV）与逆转录病毒共同纯化变得明显。最近，我们小组已经阐明了一种利用针对Moloney鼠白血病病毒的病毒包膜糖蛋白的免疫沉淀方法从含有EV的细胞上清液中分离完整和高度富集的逆转录病毒病毒颗粒的方法（Renner et al。， 2018）。这种技术，我们称之为完整的病毒粒子免疫沉淀（IVIP），使我们能够表征这些逆转录病毒表面上表位的可及性，并评估病毒包膜中病毒编码的整合膜蛋白Glycogag（gPr80）的方向。该方案的正确实施使得能够快速，简单且可重复地制备完整且高度纯化的逆转录病毒颗粒，其没有可检测的EV污染物。
【背景】广泛使用的分离逆转录病毒的方法，如人类免疫缺陷病毒（HIV）和小鼠白血病病毒（MLV），包括沉淀，色谱，超滤，超速离心，以及各种其他粒子分离方法（评论在Nestola et al。，2015）。虽然每种技术都有其特定的优点，缺点和局限性，但所有方法的共同关注点是细胞分泌的细胞外囊泡（EV）的共同纯化。
EV构成由所有细胞类型分泌的膜衍生囊泡的异质群体（Yanez-Mo ...
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