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Date:
2018-08-20
[Abstract] This protocol describes how to isolate murine endothelial cells from newborn mice brain and 3-month-old mice lung by modifying the original protocols (Sobczak et al., 2010; Ruck et al., 2014). We have used the protocol to analyze mRNA expression level in brain endothelial cells (Sawaguchi et al., 2017). Isolated lung endothelial cells were expanded in vitro for various downstream experiments such as gene expression analysis and cell-based signaling assay.
[摘要] 该协议描述了如何通过修改原始方案从新生小鼠脑和3个月大的小鼠肺中分离鼠内皮细胞（Sobczak et al。，2010; Ruck et al。，2014）。 我们使用该方案分析脑内皮细胞中的mRNA表达水平（Sawaguchi et al。，2017）。 分离的肺内皮细胞在体外扩增用于各种下游实验，例如基因表达分析和基于细胞的信号传导测定。
【背景】 该方案描述了从小鼠脑和肺中分离鼠内皮细胞的实验程序。 我们使用新生小鼠使用抗CD31抗体分离脑内皮细胞。 使用该方案，可以从脑内皮细胞中分离出适合于基因表达分析的2μg总RNA，尽管不能完全消除周细胞和星形胶质细胞。 我们还使用3个月大的小鼠肺使用抗CD31和抗CD102抗体分离肺内皮细胞。 将分离的肺内皮细胞在体外6cm培养皿中扩增，并用于各种下游实验，例如基因表达分析和基于细胞的信号传导测定。
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