| Image-Based Analysis of Mitochondrial Area and Counting from Adult Mouse Dopaminergic Neurites
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Mitochondria form dynamic cytoplasmic networks which undergo morphological changes in order to adapt to cellular stresses and signals. These changes can include alterations in size and number within a given cell. Analysis of the whole network can be a useful metric to assess overall mitochondrial health, particularly in neurons, which are highly sensitive to mitochondrial dysfunction. Here we describe a method which combines immunofluorescence and computerized image analysis to measure mitochondrial morphology (quantification of number, density, and area) in dopaminergic neurites of mice expressing mitochondrially-targeted eYFP.
[摘要] 线粒体形成动态细胞质网络，其经历形态变化以适应细胞应激和信号。 这些变化可以包括给定单元内的大小和数量的改变。 分析整个网络可以是评估整体线粒体健康的有用指标，特别是在对线粒体功能障碍高度敏感的神经元中。 在这里，我们描述了一种方法，它结合免疫荧光和计算机图像分析，以测量表达线粒体靶向eYFP的小鼠的多巴胺能神经突的线粒体形态（数量，密度和面积的量化）。
【背景】 线粒体是存在于每个复杂生物的基本上所有细胞中的双膜细胞器。它们的主要功能是提供大部分细胞能量作为ATP，但它们也在细胞凋亡，缓冲细胞内Ca 2 + ，活性氧物质产生和膜电位调节中发挥作用（Neupert和Herrmann， 2007; Hamanaka和Chandel，2010; Shutt和McBride，2013）。
这些细胞器通常被描述为单个“豆状”结构，实际上是动态细胞质网络的组成部分。它们可以经历由膜融合和裂变的动态过程调节的主要形态变化，该过程被认为涉及通过称为线粒体自噬的过程消除功能障碍的细胞器。线粒体网络也可以作为对高细胞能量需求的响应而增加（Sheng，2017; Devine和Kittler，2018）。线粒体网络的形态可以根据不同的应激源而改变，并且存在多种可能的形态，即细胞类型，甚至细胞室依赖性（Picard et al。，2013 ...
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| Isolation of LYVE-1+ Endothelial Cells from Mouse Embryos
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1, or LYVE-1, is a type 1 integral membrane glycoprotein expressed by lymphatic endothelial cells (LECs). LYVE-1 is commonly used as a biological marker to visually distinguish developing lymphatic vessels from blood endothelial cells (arteries or veins). As our understanding of lymphatic biology is still lacking today, the need to isolate LECs apart from other endothelial cells has taken on greater importance. The following procedure describes a magnetic bead separation procedure for isolating LEC-rich populations of cells from developing mouse embryos.
[摘要] 淋巴管内皮透明质酸受体1或LYVE-1是由淋巴管内皮细胞（LEC）表达的1型整合膜糖蛋白。 LYVE-1通常用作生物标记物，以在视觉上区分发育中的淋巴管与血液内皮细胞（动脉或静脉）。 由于我们今天仍然缺乏对淋巴生物学的理解，因此将LEC与其他内皮细胞分离的必要性变得更加重要。 以下程序描述了用于从发育中的小鼠胚胎中分离富含LEC的细胞群的磁珠分离程序。
【背景】淋巴脉管系统形成二次循环系统，其起到从组织排出细胞外液的作用，允许脂质的转运，并提供免疫细胞运输和运输功能。虽然我们对淋巴系统的理解在过去的几十年中迅速扩大，但与我们对动脉和静脉生物学的了解相比，它仍然缺乏。 LECs鉴定LYVE-1受体表达提供了区分淋巴组织的有用工具，但已知LYVE-1在其他组织中表达，包括肝和脾窦状细胞和胰腺外分泌和朗格汉斯细胞胰岛（Banerji et al。，1999）。由LYVE1基因编码，LYVE-1受体的生物学功能尚未确定，但除了跨内皮细胞的HA转运外，还有人建议参与肿瘤转移（Jackson，2003）。尽管LYVE-1在多种组织中表达，但它仍然是目前用于区分LEC与其他内皮细胞的常用标记物。该方法的目的是使用与LYVE-1抗体偶联的dynabeads以正选择方法从发育中的小鼠胚胎中分离LEC。
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