|
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Inositol phosphates (IPs) comprise a family of ubiquitous eukaryotic signaling molecules. They have been linked to the regulation of a pleiotropy of important cellular activities, but low abundance and detection difficulties have hampered our understanding. Here we present a method to purify and enrich IPs or other phosphate-rich metabolites from mammalian cells or other sample types. Acid-extracted IPs from cells bind selectively via their phosphate groups to titanium dioxide beads. After washing, the IPs are easily eluted from the beads by increasing the pH. This technique, in combination with downstream analytical methods such as PAGE or SAX-HPLC, opens unprecedented investigative possibilities, allowing appropriate analysis of IPs from virtually any biological or non-biological source.
[摘要] 肌醇磷酸（IP）包含普遍存在的真核信号分子家族。 它们与重要细胞活动的多效性的调节有关，但低丰度和检测困难阻碍了我们的理解。 在这里，我们提出了一种从哺乳动物细胞或其他样本类型中纯化和富集IP或其他富含磷酸盐的代谢物的方法。 来自细胞的酸提取的IP通过其磷酸基团选择性地结合到二氧化钛珠子上。 洗涤后，通过增加pH容易从珠中洗脱IP。 该技术与下游分析方法（如PAGE或SAX-HPLC）相结合，开启了前所未有的研究可能性，允许从几乎任何生物或非生物来源对IP进行适当分析。
【背景】肌醇磷酸（IP）是保守信号分子家族，在真核生物中普遍存在（Irvine和Schell，2001; Tsui和York，2010）。它们涉及广泛的细胞活动的调节，包括钙信号传导，运输和磷酸盐稳态（Wilson et al。，2013; Thota和Bhandari，2015; Azevedo和Saiardi，2017; ）。然而，我们对IP信号的理解受到了它们难以研究的事实的阻碍。
与其他富含磷酸盐的分子（例如核苷酸）不同，IP在UV / Vis范围内不吸收，并且通常以相对低的丰度存在于细胞中。用于IP检测和分析的传统方法是用 3 ...
|