| Mouse Adipose Tissue Protein Extraction
|
|
Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] As obesity becomes a global epidemic, the metabolism research field is increasingly focusing on studying the physiological and pathological roles of adipose tissues (AT). However, extracting proteins from AT is challenging due to abundant fat content of intracellular lipid droplets. Several commercial kits for extraction of AT proteins are available, as are protocols (such as the RELi protocol as well as other protein precipitation protocols). The protocols have been introduced to improve the quality and yield of extractions, but these methods either increase the cost or involve multiple steps. Herein, we describe a detailed protocol for mouse AT protein extractions based on our daily laboratory practice. This protocol requires only very common reagents and instruments, and can be ...
[摘要] [摘要 ] 随着肥胖成为全球性流行病，新陈代谢研究领域越来越集中于研究脂肪组织（AT）的生理和病理作用。然而，由于细胞内脂质滴中脂肪含量丰富，从AT中提取蛋白质具有挑战性。可提供用于提取AT蛋白的商业试剂盒，以及方案（例如RELi 该协议已被引入以提高提取的质量和产量，但是这些方法要么增加了成本，要么涉及多个步骤。在此，我们描述了一种基于小鼠AT蛋白提取的详细协议我们的日常实验室操作。该方案仅需非常通用的试剂和仪器即可完成，可在90-120分钟内完成并提供良好的总蛋白质含量回收率。因此，该方案是一种经济诱人，省时且高效的提取方法。来自AT的蛋白质。
[背景 ] 研究脂肪组织（AT）以解决与肥胖症病理生理学相关的问题通常涉及分析AT蛋白质。然而，AT蛋白质样品中的脂质污染严重影响蛋白质定量的准确性，蛋白质印迹图像的质量以及样品处理下游应用对。为了最大限度地减少脂质污染，商业试剂盒已被开发，如分TM 总蛋白提取试剂盒对脂肪组织/脂肪细胞培养S（发明生物技术公司，2017年）。中号矿全面协议的目标是减少脂肪含量，如过量的脂质（的去除RELI ）协议（迪亚兹马林等人，2019）和三氯乙酸（TCA）为基础的蛋白质沉淀法（Benbdelkamel 等人，2018）。尽管提高提取质量已经证实利用在上述过程中，这些方法的缺点也很明显：利用可商购的试剂盒 ...
|
|
|
| Using Seed Chipping to Genotype Maize Kernels
|
|
Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] Zea mays (maize) is an important model organism for studying monocot growth and development. Genotyping maize in the greenhouse or field can be time consuming and costly. Here, we describe a method to remove or chip a small amount of the endosperm from a maize kernel to genotype the kernel prior to planting. The seed chip is removed with a razor blade for DNA extraction and subsequent genotyping. When done correctly, seeds germinate normally and the kernel genotype can be determined before planting thus saving time, money, and field space.
[摘要] [摘要] 玉米玉米（玉米） 是一种重要的模式生物的研究单子叶植物的生长和发育。基因分型玉米中的温室或字段可以是时间消耗和昂贵的。在这里，我们描述了一个方法来去除或芯片一个小数额的的胚乳从一个玉米的内核，以基因型 该内核之前以种植。所述种子芯片被除去与一个剃刀刀片用于DNA 提取和随后的基因分型。当完成正确，种子发芽正常，并在内核基因型可以被确定之前播种从而节省了时间，金钱，和现场的空间。
[背景 ] 玉米是一个农业重要的作物是被种植在整个的世界。它具有许多用途，包括人类消费，动物饲料，和乙醇生产（Ranum 等人，2014） 。玉米是也是一个有用的模型用于研究一个宽范围的生物学问题，包括植物驯化，单子叶植物的生长和发育，病虫害抗性，以及基因组进化（Strable 和斯坎伦，2009） 。尽管玉米有许多科学和工业用途，这是一个大工厂是需要显著空间中任意一个温室或田间到增长。在除了对所述成本的保持一个温室或田间，相当大的努力是需要以执行涉及交叉和收集植物材料用于基因分型和其他分析。由于到这些因素，将能以基因型玉米内核之前以种植是有价值的。这个协议描述的过程的种子碎裂，其中一个小片的胚乳被除去与一个剃刀刀片以被用于对DNA 提取和基因分型。这个协议是一个修饰的一个方法，其中内核是浸泡在水中之前到碎裂（高等人，2008） ...
|
|
|
| Zebrafish Bacterial Infection Assay to Study Host-Pathogen Interactions
|
|
Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] The study of host-pathogen interactions has improved our understanding of both pathogenesis and the response of the host to infection, including both innate and adaptive responses. Neutrophils and macrophages represent the first line of innate host defense against any infection. The zebrafish is an ideal model to study the response of these cells to a variety of pathogens. Zebrafish possess both neutrophils and macrophages exhibiting similar defense mechanisms to their human counterparts. The transparency of zebrafish embryos greatly facilitates in vivo tracking of infection dynamics in a non-invasive manner at high-resolution using labelled pathogens, while immune cells can also be labelled transgenically to enable even more in-depth analysis. Here we describe a procedure for ...
[摘要]
[ 文摘动作 ] 宿主-病原体相互作用的研究已经提高了我们既发病机制和宿主对INFE响应的理解ction，包括先天性和适应性应答。中性粒细胞和巨噬细胞是抵抗任何感染的先天宿主防御的第一线。斑马鱼是研究这些细胞对多种病原体反应的理想模型。斑马鱼同时具有嗜中性粒细胞和巨噬细胞表现出荷兰国际集团类似的防御机制，它们人的相应。斑马鱼胚胎的透明性极大地促进了体内 使用标记的病原体以非侵入性的方式以高分辨率跟踪感染动态，同时还可以通过转基因方式标记免疫细胞，以进行更深入的分析。在这里，我们描述了一种方法，用于执行一个在斑马鱼中的细菌感染测定胚胎使用荧光标记的大肠杆菌细菌和演示感染动力学的监测和定量。值得注意的是，该程序有助于理解对驱动先天免疫应答至关重要的基因的功能作用。
[ 背景 ] 宿主-病原体相互作用的研究是重要的是了解疾病的发病机理，也为有效治疗药物的开发。需要确定宿主和病原体的多个方面，以确定宿主中的潜在危险因素和病原体中的关键毒力因素。先天性免疫是抵抗感染的第一道防线，它会引发一连串的反应，包括炎症，中和和适应性免疫系统各组分的募集（Akira et ...
|
|
|