|
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] The physiological importance of mitochondrial calcium uptake, observed in processes such as ATP production, intracellular calcium signaling, and apoptosis, makes desirable a simple, straightforward way of investigating this event with unambiguous results. The following protocol uses a calcium-sensitive, membrane-impermeable fluorophore to monitor extra-mitochondrial calcium levels in the presence of permeabilized mammalian cells harboring activated mitochondria.
[摘要] 在诸如ATP产生，细胞内钙信号传导和细胞凋亡的过程中观察到的线粒体钙摄取的生理学重要性使得以明确的结果研究该事件的简单，直接的方式成为可取的。 以下方案使用钙敏感的膜不可渗透的荧光团来监测在具有活化的线粒体的透化的哺乳动物细胞存在下的线粒体外钙水平。
【背景】线粒体钙单向转运蛋白（MCU）介导的钙通量是钙进入线粒体的主要方式。线粒体钙由于几个原因是重要的，其中三个原因经常在文献中引用。其一，线粒体中的钙激活Krebs循环中的关键脱氢酶，导致ATP产生增加。最近的一项研究表明，线粒体钙对F1FO-ATP酶和细胞色素链活性有直接影响（Glancy和Balaban，2012），进一步增强其在细胞能量产生中的关键作用。二，由于MCU的低微摩尔亲和力和大量细胞溶质钙线粒体可以隔离，MCU介导的钙摄取也在清除细胞质钙的瞬时增加中起关键作用，反过来，形成使用钙的细胞信号通路作为第二信使（Wheeler et al。，2012）。三，线粒体钙的调节在细胞凋亡的调节中起重要作用（Zoratti和Szabo，1995）。线粒体钙水平的急剧增加通过诱导内膜中线粒体通透性转换孔的开放而引发细胞死亡，这一事件消除了线粒体内部膜电位并从膜间隙释放细胞色素C，暗黑/ Smac和半胱氨酸蛋白酶（ Zoratti和Szabo，1995; ...
|