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Date:
2018-07-20
[Abstract] Green fluorescent protein (GFP) is widely used as a molecular tool to assess protein expression and localization. In C. elegans, the signal from weakly expressed GFP fusion proteins is masked by autofluorescence emitted from the intestinal lysosome-related gut granules. For instance, the GFP fluorescence from SKN-1 transcription factor fused to GFP is barely visible with common GFP (FITC) filter setups. Furthermore, this intestinal autofluorescence increases upon heat stress, oxidative stress (sodium azide), and during aging, thereby masking GFP expression even from proximal tissues. Here, we describe a triple band GFP filter setup that separates the GFP signal from autofluorescence, displaying GFP in green and autofluorescence in yellow. In addition, yellow fluorescent protein ...
[摘要] 绿色荧光蛋白（GFP）被广泛用作评估蛋白质表达和定位的分子工具。在 C中。线虫，来自弱表达的GFP融合蛋白的信号被肠溶酶体相关肠道颗粒发出的自发荧光掩盖。例如，使用常见的GFP（FITC）过滤器设置几乎看不到融合到GFP的SKN-1转录因子的GFP荧光。此外，这种肠自发荧光在热应激，氧化应激（叠氮化钠）和衰老过程中增加，从而甚至从近端组织掩蔽GFP表达。在这里，我们描述了一个三频段GFP滤波器设置，将GFP信号与自发荧光分开，显示绿色GFP和黄色自发荧光。此外，黄色荧光蛋白（YFP）仍然可以与黄色自发荧光和GFP区别开来，这种三重带滤光器设置。虽然使用三频段GFP过滤器设置可能会损失一些GFP强度，但优点是不需要修改当前使用的转基因GFP系列，并且这些GFP过滤器易于安装。因此，通过使用这种三重带GFP过滤器设置，研究人员可以轻松地将自发荧光与其最喜欢的转基因 C中的GFP和YFP区分开来。线虫线。
【背景】自发荧光的主要来源包括细胞内溶酶体衍生的颗粒，线粒体（即，自发荧光分子如NAD（P）H和黄素）或细胞外胶原蛋白（Hermann 等。 ，2005; Monici，2005）。在老化过程中，自发荧光材料如脂褐素和晚期糖基化终产物（AGE）积聚。在线虫 C.线虫，肠道颗粒的自发荧光在胚胎发生过程中已经开始，反映了溶酶体相关细胞器的生物发生（Hermann ...
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