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Date:
2018-07-20
[Abstract] The smut fungus Ustilago maydis is an established model organism for elucidating how biotrophic pathogens colonize plants and how gene families contribute to virulence. Here we describe a step by step protocol for the generation of CRISPR plasmids for single and multiplexed gene editing in U. maydis. Furthermore, we describe the necessary steps required for generating edited clonal populations, losing the Cas9 containing plasmid, and for selecting the desired clones.
[摘要] 黑穗病真菌 Ustilago maydis 是一种既定的模式生物，用于阐明生物营养病原体如何在植物中定殖以及基因家族如何对毒力作出贡献。 在这里，我们描述了用于生成用于 U中单个和多重基因编辑的CRISPR质粒的逐步方案。玉米小斑病。 此外，我们描述了产生编辑的克隆群体，丢失含有Cas9的质粒以及选择所需克隆所需的必要步骤。
【背景】担子菌真菌 U. maydis 是一种模式生物，能够在DNA修复和同源重组，交配，性发育，次级代谢，丝状生长，RNA转运和毒力等主题中获得重要发现（Holliday，2004; Steinberg，2007; Bakkeren et al。，2008; Holloman et al。，2008; Lanver et al。，2017; Niessing et al。 ，2018年）。 Ú。 maydis 是一种生物营养的植物病原体，可引起玉米的黑穗病。作为大群黑穗病真菌的典型成员，其性发育与其定殖植物的能力密切相关。 U的受欢迎程度。 maydis 作为一种模式生物存在于其短暂的致病生命周期中，该生命周期在不到两周内完成，其可用于正向和反向遗传，包括建立自我复制的质粒（Tsukuda 等。，1988），能够在没有交配的情况下引起疾病的致病性病毒株的开发和可用的注释良好的基因组（Kämper et al。，2006）。在 ...
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