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Sodium n-Dodecyl Sulfat

Company: Merck
Catalog#: 428015
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Company-protocol()
Other protocol()

Nuclear/Cytoplasmic Fractionation of Proteins from Caenorhabditis elegans
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  C. elegans is widely used to investigate biological processes related to health and disease. To study protein localization, fluorescently-tagged proteins can be used in vivo or immunohistochemistry can be performed in whole worms. Here, we describe a technique to localize a protein of interest at a subcellular level in C. elegans lysates, which can give insight into the location, function and/or toxicity of proteins. [摘要]  ℃。 线虫>广泛用于研究与健康和疾病相关的生物过程。 为了研究蛋白质定位,荧光标记的蛋白质可用于体内>或免疫组织化学可在整个蠕虫中进行。 在这里,我们描述了一种在 C中亚细胞水平定位感兴趣的蛋白质的技术。 线虫>裂解物,可以洞察蛋白质的位置,功能和/或毒性。
【背景】亚细胞分级已用于不同的模式生物中以鉴定和研究细胞核,细胞膜和细胞质中的蛋白质功能。 例如,当聚集倾向蛋白定位于细胞核或细胞质中时,它们的毒性可能更大(Kontopoulos et al。>,2006; Barmada et al。>,2010)。 在这里,我们提供了一个协议(改编自Chen et al。>,2000和La Rocca et al。>,2007)来定位的细胞核和细胞质组分中的特定蛋白质。>℃。线虫>。

Sleeping Beauty Transposon-based System for Rapid Generation of HBV-replicating Stable Cell Lines
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract]  The stable HBV-transfected cell lines, which based on stable integration of replication-competent HBV genome into hepatic cells, are widely used in basic research and antiviral drug evaluation against HBV. However, previous reported strategies to generate HBV-replicating cell lines, which primarily rely on random integration of exogenous DNA by plasmid transfection, are inefficient and time-consuming. We newly developed an all-in-one Sleeping Beauty transposon system (denoted pTSMP-HBV vector) for robust generation of stable HBV-replicating cell lines of different genotype. The pTSMP-HBV vector contains HBV 1.3-copy genome and dual selection markers (mCherry and puromycin resistance gene), allowing rapid enrichment of stably-transfected cells via red fluorescence-activated cell sorting ... [摘要]  稳定的HBV转染细胞系基于将复制能力的HBV基因组稳定整合到肝细胞中,广泛用于基础研究和针对HBV的抗病毒药物评估。然而,先前报道的产生HBV复制细胞系的策略(其主要依赖于通过质粒转染的外源DNA的随机整合)是低效且耗时的。我们新开发了一体化睡眠美容转座子系统(表示为pTSMP-HBV载体),用于稳定产生不同基因型的稳定HBV复制细胞系。 pTSMP-HBV载体含有HBV1.3拷贝基因组和双重选择标记(mCherry和嘌呤霉素抗性基因),允许通过红色荧光激活细胞分选和嘌呤霉素抗生素选择快速富集稳定转染的细胞。在该方案中,我们描述了构建HBV复制稳定细胞和系统评估这些细胞的HBV复制和病毒蛋白表达谱的详细程序。

【背景】慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染目前是一个主要的公共卫生负担,影响全球超过2.4亿人(Witt-Kehati et al。,2016)。慢性HBV患者患慢性活动性肝炎,肝硬化或原发性肝细胞癌(HCC)的风险升高(Schweitzer et al。,2015)。目前用干扰素-α或核苷类似物治疗并不能根除病毒,它们对清除乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用有限(Lucifora和Protzer,2016; Soriano et al。,2017) 。因此,迫切需要开发新的抗病毒抑制剂(Nassal,2015)。

用于评估新药抗HBV活性的细胞培养模型是新药开发的重要工具。稳定的HBV复制细胞系,携带复制能力的HBV基因组稳定整合到人肝癌细胞系(Huh7和/或HepG2)的基因组中,被广泛用于评估抗病毒药物的作用(Witt-Kehati ...

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