| Brain Tissue Culture of Per2::Luciferase Transgenic Mice for ex vivo Bioluminescence
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] In circadian research, it is essential to be able to track a biological rhythm for several days with the minimum perturbation for the organisms or tissues. The use of transgenic mice lines, in which the luciferase reporter is coupled to a molecular clock protein (here PERIOD2), gives us the opportunity to follow the circadian activity in different tissues or even single clock cells for days without manipulation. This method creates sections using a mouse brain matrix, which allows us to obtain several brain samples quickly at a single time point.
[摘要] 在昼夜节律研究中，能够以最小的生物或组织扰动跟踪生物节律数天是至关重要的。 使用转基因小鼠系，其中荧光素酶报告基因与分子钟蛋白（此处为PERIOD2）偶联，使我们有机会在不经操作的情况下跟踪不同组织或甚至单个时钟细胞中的昼夜节律活动数天。 该方法使用鼠标脑矩阵创建切片，这允许我们在单个时间点快速获得几个脑样本。
【背景】昼夜节律是大约24小时循环的行为或分子变化，并且在没有任何外部线索的情况下持续。在哺乳动物中，运动活动，体温和激素释放是昼夜节律的实例，其在位于下丘脑的视交叉上核（SCN）时钟的控制下。 SCN细胞保持内源性节律的能力是由于时钟基因表达的正负循环组成的分子机制：首先，CLOCK和BMAL1蛋白异二聚化通过E-box位点激活不同基因的转录关于基因如 period （ Per1-3 ）和隐花色素（ Cry1-2 ; Takahashi）的启动子 et al。，2008）。然后，PERIOD和CRYPTOCHROME的蛋白质异二聚化并返回到细胞核以防止BMAL1与E-Box结合。因此，PERIOD和CRYPTOCHROME抑制其自身的转录（Takahashi et al。，2008）。第二个环由类视黄醇相关的孤儿受体（ROR）和Rev-Erb组成：ROR蛋白激活 Bmal1 基因，而REV-ERB蛋白抑制它通过 ROR反应 Bmal1 ...
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| Isolation of Phages Infecting Marinomonas mediterranea by an Enrichment Protocol
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] This protocol describes the isolation of lytic phages infecting the marine bacterium Marinomonas mediterranea from samples of seawater, sand, and seagrass from Posidonia oceanica meadows. It includes the collection of samples, the enrichment method and the isolation and purification of the phages using double layer agar plates. Although the method has been optimized for M. mediterranea, it might be used in the isolation of phages infecting other Marinomonas species and marine bacteria.
[摘要] 该协议描述了从 Posidonia oceanica 草甸的海水，沙子和海草样品中分离感染海洋细菌 Marinomonas mediterranea 的裂解噬菌体。 它包括样品的收集，富集方法以及使用双层琼脂平板分离和纯化噬菌体。 虽然该方法已针对 M进行了优化。 地中海，它可能用于分离感染其他 Marinomonas 物种和海洋细菌的噬菌体。
【背景】CRISPR-Cas系统通过获取侵入性元件的核酸的短片段（间隔物），在原核生物中提供针对遗传感染的适应性免疫。这些“感染的分子记忆”用于产生指导RNA，其在新的感染发生时将Cas核酸酶靶向病原体。间隔区直接存储在宿主的基因组中，散布在CRISPR阵列的定向重复序列之间。对原核基因组以及宏基因组数据集中间隔序列库的分析突出了大量未发现的遗传病原体，这些病原体是CRISPR-Cas系统的靶标（Shmakov et al。，2017） 。感染感兴趣的微生物的噬菌体的分离可以提供对自然环境中CRISPR-Cas系统的作用机制的重要见解。
在这项工作中，我们提供了一种简单而廉价的方法，用于从该微生物的自然环境中分离感染模型细菌 Marinomonas mediterranea ...
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