| Microtitre Plate Based Cell-SELEX Method
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] Aptamers have emerged as a novel category in the field of bioreceptors due to their wide applications ranging from biosensing to therapeutics. Several variations of their screening process, called SELEX have been reported which can yield sequences with desired properties needed for their final use. We report a facile microtiter plate-based Cell-SELEX method for a gram-negative bacteria E. coli. The optimized protocol allows the reduction of number of rounds for SELEX by offering higher surface area and longer retention times. In addition, this protocol can be modified for other prokaryotic and eukaryotic cells, and glycan moieties as target for generation of high affinity bio-receptors in a short course of time in-vitro.
[摘要] 由于适体的广泛应用，从生物传感到治疗，适体已经成为生物受体领域的一个新类别。 已经报道了它们的筛选过程的几种变体，称为SELEX，其可以产生具有最终使用所需的所需性质的序列。 我们报告了一种基于微量滴定板的Cell-SELEX方法，用于革兰氏阴性菌 E.大肠杆菌>。 优化的协议允许通过提供更高的表面积和更长的保留时间来减少SELEX的轮数。 此外，该方案可以针对其他原核和真核细胞进行修饰，并且聚糖部分可以作为在短时间内体外产生高亲和力生物受体的靶标>。
【背景】适体是1990年描述的单链合成DNA或RNA（Ellington和Szostak，1990; Tuerk和Gold，1990），具有独特的3D几何结构，这是其序列的表现。不同的序列允许合成适体，其可以结合从小分子到大蛋白质的分子阵列。这使得适配体成为常规抗体的竞争对手，常规抗体由于结构限制而限于蛋白质作为其靶标，并且不能针对高风险病原体产生，因为这些通常比产生高亲和力所需的时间更早地杀死宿主。抗体。适体在体外>设置中产生，因此可以有效地用于高风险病原体。 SELEX（ S L > > > > > > > > >分离导致在低nM范围内具有解离常数的池的筛选。已经提出了SELEX的几种变体，其使用各种固定基质，包括毛细管电泳SELEX，基于亲和层析的SELEX，磁珠SELEX，体内> ...
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| In vitro Chaperone Activity Assay Using α-Amylase as Target Protein
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Small heat shock proteins (sHSP) are stress proteins which are ubiquitously found in almost all living organisms. They function as molecular chaperones, which assist in protein folding during translation and in the prevention of irreversible protein aggregation under denaturing conditions. This protocol describes the use of α-amylase as target protein in assessing the chaperone activity of wild and mutant recombinant small heat shock proteins of Mycobacterium leprae. Chaperone activity of these proteins, along with α-crystallin, a standard sHSP was demonstrated using a new method employing their protective effect against heat denaturation of α-amylase from porcine pancreas. The regained enzymatic activity of the α-amylase was demonstrated on starch agar plates stained with ...
[摘要] 小热休克蛋白（sHSP）是在几乎所有生物体中无处不在发现的应激蛋白。 它们作为分子伴侣起作用，这有助于在翻译过程中蛋白质折叠以及在变性条件下预防不可逆的蛋白质聚集。 该协议描述了使用α-淀粉酶作为靶蛋白来评估麻风分枝杆菌的野生和突变重组小热休克蛋白的分子伴侣活性。 这些蛋白质的陪伴分子活性以及标准sHSP的α-晶状体蛋白通过采用其对猪胰α-淀粉酶的热变性的保护作用的新方法被证实。 在用碘 - 碘化钾（I 2 -KI）溶液染色的淀粉琼脂平板上证实α-淀粉酶的重新酶活性。
【背景】热休克蛋白（HSPs）是一组保守的蛋白质，当细胞暴露于外部应激（包括热应激和冷应激）时诱导蛋白质。该组中的大多数成员在功能上与蛋白质折叠和解折叠机制有关。小热休克蛋白（sHSPs）是热休克蛋白的子集，其分子大小为12至43kDa，并且保守的C末端区域称为'α-晶域'。 sHSP通过与部分未折叠的蛋白结合并阻止其完全变性而显示ATP非依赖性分子伴侣活性。有几种用于证明sHSPs的体外伴侣蛋白活性的方法，其使用各种底物蛋白如RuBisCO（Goloubinoff等人，1989），rhodanese（Mendoza等人（Farahbakhsh等，1995），溶菌酶（Rozema和Gellman，1996），苹果酸脱氢酶（Lee等， ...
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