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Sodium di-Hydrogen Phosphate 1-hydrate

Company: AppliChem
Catalog#: 131965
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Company-protocol()
Other protocol()

α-Synuclein Aggregation Monitored by Thioflavin T Fluorescence Assay
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract]  Studying the aggregation of amyloid proteins like α-synuclein in vitro is a convenient and popular tool to gain kinetic insights into aggregation as well as to study factors (e.g., aggregation inhibitors) that influence it. These aggregation assays typically make use of the fluorescence dye Thioflavin T as a sensitive fluorescence reporter of amyloid fibril formation and are conducted in a plate-reader-based format, permitting the simultaneous screening of multiple samples and conditions. However, aggregation assays are generally prone to poor reproducibility due to the stochastic nature of fibril nucleation and the multiplicity of modulating factors. Here we present a simple and reproducible protocol to study the aggregation of α-synuclein in a plate-reader based assay. [摘要]  研究淀粉样蛋白如α-突触核蛋白体外聚集是一种方便和流行的工具,可以获得聚集的动力学见解以及研究因子(例如,聚集抑制剂) 影响它。 这些聚集测定通常利用荧光染料硫磺素T作为淀粉样蛋白原纤维形成的敏感荧光报告物,并且以基于读板器的形式进行,允许同时筛选多个样品和条件。 然而,由于原纤维成核的随机性质和调节因子的多样性,聚集测定通常倾向于较差的再现性。 在这里,我们提出了一个简单和可重复的协议,以研究基于读板器的测定中α-突触核蛋白的聚集。

【背景】内源性蛋白质与淀粉样原纤维的聚集是一种致病过程,与几种疾病相关,例如,神经退行性疾病如阿尔茨海默病(AD)或帕金森病(PD)以及全身性疾病如AL淀粉样变性( Knowles et al。,2014)。通过基于硫磺素T荧光的聚集测定,可以在基于板读者的装置中在体外中概括该过程,从而允许根据各种影响因素研究淀粉样蛋白的聚集动力学。

硫磺素T(ThT)是一种荧光染料,最初用于组织学样本中的淀粉样蛋白原纤维染色,于1959年由Vassar和Culling(Vassar和Culling,1959),其在体外检测和定量淀粉样纤维的应用

目前,硫代黄素T的聚集测定主要在荧光板读数器中进行,其中例如,96条件可以同时测试。由于原纤维成核的随机性质和影响蛋白质聚集的多种因素,这些测定法具有较差的重现性。因此,已经采用了增加ThT测定的再现性的策略,例如在测量期间使用井板的轨道摇动以及向孔中添加玻璃珠以改善混合(Giehm和Otzen,2010)。 ...

Characterizing the Transcriptional Effects of Endolysin Treatment on Established Biofilms of Staphylococcus aureus
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  Biofilms are the most common lifestyle of bacteria in both natural and human environments. The organized structure of these multicellular communities generally protects bacterial cells from external challenges, thereby enhancing their ability to survive treatment with antibiotics or disinfectants. For this reason, the search for new antibiofilm strategies is an active field of study. In this context, bacteriophages (viruses that infect bacteria) and their derived proteins have been proposed as promising alternatives for eliminating biofilms. For instance, endolysins can degrade peptidoglycan and, ultimately, lyse the target bacterial cells. However, it is important to characterize the responses of bacterial cells exposed to these compounds in order to improve the design of phage-based ... [摘要]  生物膜是自然和人类环境中最常见的细菌生活方式。这些多细胞社区的有组织结构通常保护细菌细胞免受外部挑战,从而增强其抗生素或消毒剂治疗的生存能力。为此,寻找新的抗菌膜策略是一个积极的研究领域。在这种情况下,已提出噬菌体(感染细菌的病毒)及其衍生蛋白作为消除生物膜的有希望的替代物。例如,内溶素可降解肽聚糖,并最终裂解靶细菌细胞。然而,表征暴露于这些化合物的细菌细胞的反应以改进基于噬菌体的抗微生物策略的设计是重要的。

如以前在Fernández等人(2017)中所描述的,开发该协议以检查暴露于内溶素处理的金黄色葡萄球菌生物膜细胞的转录反应。然而,它可能随后适用于分析其他微生物对不同抗菌剂的反应。

【背景】越来越清楚的是,亚抑制剂量的抗菌剂可能对目标微生物的不同表型具有调节作用,包括生物膜形成,代谢或毒力。因此,研究新化合物对低浓度靶细胞的潜在影响应该是发展过程的一部分。事实上,引发毒力因子或抗生素耐药决定簇产生的非常有效的抗菌剂可能不是治疗应用的良好候选者。另一方面,考虑到生物膜和浮游细胞之间的生理差异,应该对生物膜形成细胞分析新抗生物膜剂的作用似乎是合乎逻辑的。在这里,我们描述了一种协议,用于分析生物膜细胞在亚抑制浓度的内抑素浓度下的转录反应,噬菌体来源的蛋白质作为生物膜去除剂展现出巨大的前景。因此,通过RNA-seq将内溶素处理的细胞的转录组与对照细胞进行比较,并且后来通过RT-qPCR证实了所选基因的差异表达。 ...

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