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Methanol

Company: Merck
Catalog#: 106002
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GC-MS-Based Analysis of Methanol: Chloroform-extracted Fatty Acids from Plant Tissues
Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract]  Fatty acids (FAs) are carboxylic acids with long aliphatic chains that may be straight, branched and saturated or unsaturated. Most of the naturally occurring plant FAs contains an even number of carbon (C4-C24). FAs are used in food and pharmacological industries due to their nutritional importance. In addition, FAs are considered as a promising alternative for the production of biodiesel from terrestrial plant biomass. To establish commercial applications, more reliable analytical methods are needed for the identification, quantification, and composition determination of FAs. Here, we describe a relatively rapid and sensitive method for the extraction, identification, and quantification of FAs from a small quantity of plant tissue. The method includes steps of lipid extraction, ... [摘要]  脂肪酸(FAs)是具有长脂肪链的羧酸,其可以是直链,支链和饱和或不饱和的。大多数天然存在的植物FA含有偶数碳(C4-C24)。由于其营养重要性,FA用于食品和药理学工业。此外,FAs被认为是从陆地植物生物质生产生物柴油的有前途的替代品。为了建立商业应用,需要更可靠的分析方法来确定FA的鉴定,定量和组成。在这里,我们描述了一种相对快速和灵敏的方法,用于从少量植物组织中提取,鉴定和量化FA。该方法包括脂质提取,通过转甲基化将脂质转化为脂肪酸甲酯(FAME),使用气相色谱 - 质谱(GC-MS)鉴定和定量FAME的步骤。在该方案中,在GC-MS分析之前添加内标。每个FA的量由其相对于内标峰面积的峰面积计算。

【背景】脂肪酸的合成对于代谢能的储存是重要的。不断增长的人口和能源成本强调了生产可持续可再生燃料的必要性。第二代生物燃料的来源是非食用油籽作物或木质纤维素生物质,主要包括作物植物的废弃物,如多年生草,包括柳枝稷,果壳,稻草和森林残留物(Hadar,2013)。在这种情况下,植物可以作为研究脂肪酸用于营养保健品和生物柴油方面的优秀系统。此外,在生物柴油生产中,燃料的清洁燃烧性质受到FA的结构特征的影响,包括链长和不饱和度(Knothe,2005)。木质纤维素生物质是直接从经济有效的资源生产这些产品的更环保的替代品。使用GC-MS进行FA分析可以对单一植物提取物中相对多种脂肪酸进行标准化,注释和定量。脂质提取的效率取决于溶剂的极性。极性脂质(如糖脂或磷脂)更易溶于极性溶剂(如醇类),非极性脂质(如三酰基甘油)更易溶于非极性溶剂(如氯仿)。因此,总脂质提取取决于有机溶剂的性质。 ...

Preparation of Cell-free Synthesized Proteins Selectively Double Labeled for Single-molecule FRET Studies
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  Single-molecule FRET (smFRET) is a powerful tool to investigate molecular structures and conformational changes of biological molecules. The technique requires protein samples that are site-specifically equipped with a pair of donor and acceptor fluorophores. Here, we present a detailed protocol for preparing double-labeled proteins for smFRET studies. The protocol describes two cell-free approaches to achieve a selective label scheme that allows the highest possible accuracy in inter‐dye distance determination. [摘要]  单分子FRET(smFRET)是研究生物分子的分子结构和构象变化的有力工具。 该技术需要蛋白质样品,该样品是特定位点配有一对供体和受体荧光团的。 在这里,我们提供了一个制备smFRET研究的双标记蛋白的详细方案。 该协议描述了两种无细胞方法来实现选择性标记方案,其允许在染料间距离确定中具有最高可能的准确性。

【背景】单分子FRET(smFRET)是结构生物学中最重要的工具之一,特别是用于分析蛋白质的结构和功能构象变化(Michalet等人,2006; Roy等人。,2008; Sustarsic和Kapanidis,2015)。然而,smFRET的广泛应用在许多情况下受限于合适的蛋白质样品的精细生产。这些蛋白质需要配备两个荧光团,位点特异性连接在蛋白质结构内的不同位置。

经典的基于细胞的蛋白质生产需要一系列耗时的步骤,可以通过使用无细胞蛋白质合成(CFPS)系统来克服,允许更快且直接地生产和选择适当的双标记蛋白质。此外,CFPS的另一个优点是由于几类蛋白质如蛋白酶或膜蛋白对活细胞或其他原因有毒,难以在细胞中表达,可以在CFPS系统中成功合成。最后,CFPS是专注于光谱技术如smFRET的实验室的理想工具,因为细胞培养不是必需的,并且不必考虑重组生物的安全规定。

尽管smFRET所需的样本量本质上很低,但迄今为止,在smFRET研究中,CFPS尚未被标准地用于生产样本。这主要是由于与基于细胞的系统相比蛋白质产量低得多,并且缺乏适当的无细胞方法,其允许适当量的双标记蛋白质的方便合成。然而,正如我们的小组所表明的那样,得益于更高效的正交标记方案(Sadoine ...

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