| Molecular Size Analysis of Recombinant Importin-histone Complexes Using Analytical Ultracentrifugation
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Histones constitute the protein components of nucleosomes. Despite their small sizes, histones do not diffuse through the nuclear pore complex. Instead, they are transported to the nucleus by importins, either alone or in complex with histone chaperones. Determining the molecular size of the importin-histone complexes is key to understanding the mechanism of histone transport and also the potential roles of importins as histone chaperones and in the assembly of nucleosomes. Here we report a simple and reproducible sedimentation-velocity based method to determine the molecular sizes of importin-histone complexes using analytical ultracentrifugation. The method does not use any reporter tags or interaction with column resin thereby analyzing the interactions of the native proteins.
[摘要] [摘要] 组蛋白构成核小体的蛋白质成分。尽管其尺寸很小，但组蛋白不会通过核孔复合物扩散。取而代之的是，它们单独或与组蛋白分子伴侣复合地被重要蛋白转运至细胞核。确定importin-histone复合物的分子大小是理解组蛋白转运机制的关键，也是importins作为组蛋白伴侣和在核小体组装中的潜在作用的关键。在这里，我们报告了一种简单且可重现的沉降速度为基础的方法，该方法使用分析超速离心法来确定importin-histone配合物的分子大小。该方法不使用任何报告子标签或与色谱柱树脂的相互作用，从而分析了天然蛋白质的相互作用。
[背景] 核小体是真核染色质的最基本的结构和功能单元。组蛋白H2A，H2B，H3和H 4是核小体的蛋白质成分。每个核包括147个碱基的DNA wrapp的对编绕Ñ H3-H4四聚体和H2A-H2B二聚体的两个拷贝（Luger的等人，1997年一）。像细胞中的其他蛋白质一样，组蛋白在细胞质中合成。然而，核小体组装在核中。尽管它们的小尺寸（单体是10-15 kDa）的，组蛋白不通过核孔复合物扩散，而是可以单独使用或在复合物与由组蛋白importins伴侣输送要么（约翰逊-SAL IBA 等人，2000 ; Baake 等等人，2001；Mosammaparast 等人，2001，2002a和2002b；Muhlhausser ...
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| Hyaluronan Isolation from Mouse Mammary Gland
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Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] The glycosaminoglycan hyaluronan (HA) is a key component of the extracellular matrix. The molecular weight of HA is heterogeneous and can reach from several million to several hundred daltons. The effect of HA on cell behavior is size dependent; fragmented HA acts as a danger signal, stimulates cell migration and proliferation and is proinflammatory, native high molecular weight HA suppresses inflammation. Therefore, it is important to analyze HA size distribution when studying the role of HA in tissue homeostasis and pathology. This protocol describes isolation of HA from mouse mammary glands but can also be applied to other tissues. The quality of the isolated HA is sufficient to analyze size distribution by gel electrophoresis (Calabro et al., 2000).
[摘要] 糖胺聚糖透明质酸（HA）是细胞外基质的关键组分。 HA的分子量是不均匀的，可以达到几百万至几百道尔顿。 HA对细胞行为的影响与尺寸有关; 片段化的HA作为危险信号起作用，刺激细胞迁移和增殖并且是促炎性的，原生高分子量HA抑制炎症。 因此，在研究HA在组织稳态和病理学中的作用时，分析HA的大小分布非常重要。 该协议描述从小鼠乳腺分离HA，但也可以应用于其他组织。 分离的HA的质量足以通过凝胶电泳分析大小分布（Calabro等人，2000）。
【背景】糖胺聚糖HA由N-乙酰葡糖胺和β葡萄糖醛酸二糖组成，并且是细胞外基质的普遍存在的组分。 高分子量HA通过酶促降解和被活性氧和氮物质氧化而碎裂。 在健康组织中，大部分HA具有高分子量。 片段化HA的积累在病理过程中起着危险信号的作用（Tolg等人，2012和2017; Yuan等人，2015）。 例如，HA片段刺激炎症，而高分子量HA抑制炎症。 HA通过与细胞膜受体相互作用影响细胞行为，如细胞迁移和增殖，导致信号通路的激活。 由于受体-HA相互作用受HA大小的影响，HA对组织生物学的影响不仅取决于HA量，而且取决于各个细胞的HA大小分布和HA受体表达。
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