| Sendai Virus Propagation Using Chicken Eggs
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Sendai virus is a member of the family Paramyxoviridae, and an enveloped virus with a negative-stranded RNA genome. Sendai virus is not pathogenic to humans, but for mice and can cause pneumonia in mice. Easy and efficient techniques for propagating Sendai virus are required for studying virus replication, virus-induced innate- and adaptive-immunity, Sendai-virus-based virotherapy and IgA nephropathy. Here, we describe a protocol for Sendai virus propagation using chicken eggs. This traditional protocol enables us to generate a large amount of virus enough for animal experiments as well as cell culture experiments in a relatively inexpensive way.
[摘要] 仙台病毒是家族副粘病毒科的成员，以及具有负链RNA基因组的包膜病毒。 仙台病毒对人类无致病性，但对小鼠而言可导致小鼠肺炎。 传播仙台病毒的简便有效的技术是研究病毒复制，病毒诱导的先天免疫和适应性免疫，基于仙台病毒的病毒疗法和IgA肾病所必需的。 在这里，我们描述了使用鸡蛋传播仙台病毒的协议。 这种传统的方案使我们能够以相对便宜的方式产生足够的大量病毒用于动物实验以及细胞培养实验。
【背景】仙台病毒（SeV）是一种小鼠副流感病毒1型，于20世纪50年代在日本仙台发现（Ishida和Homma，1978）。该病毒曾被日本病毒学会命名为日本血凝病毒（HVJ），后来被称为“新生病毒性肺炎（仙台型）”（Kuroya和Ishida，1953）。 SeV这个名字目前最受欢迎，现在被认为是老鼠的病原体，而不是人类（Karron RA，2007）。 Fukumi 等人首次描述了1954年小鼠的SeV感染（Fukumi et al。，1954）。这种感染可能是亚临床的，但SeV也被认为是某些小鼠品系中肺炎的主要原因之一（Fukumi et al。，1954; Parker et al。， 1978年）。 SeV是研究以下各个领域的优秀工具：IgA肾病小鼠模型的病理机制（Yamashita et al。，2007; Chintalacharuvu et al。， ...
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| In vitro Analysis of Ubiquitin-like Protein Modification in Archaea
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] The ubiquitin-like (Ubl) protein is widely distributed in Archaea and involved in many cellular pathways. A well-established method to reconstitute archaeal Ubl protein conjugation in vitro is important to better understand the process of archaeal Ubl protein modification. This protocol describes the in vitro reconstitution of Ubl protein modification and following analysis of this modification in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon serving as the model organism.
[摘要] 泛素样（Ubl）蛋白广泛分布于古细菌中并参与许多细胞途径。 为了更好地理解古细菌Ub1蛋白质修饰的过程，重建体外古细菌Ubl蛋白质缀合物的完善方法是很重要的。 该协议描述了Ubl蛋白质修饰的体外重建以及在作为模型生物的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中对这种修饰进行分析。
【背景】泛素（Ub）与靶蛋白共价连接的过程被称为泛素化，其控制真核细胞中大量的细胞过程（Glickman和Ciechanover，2002; Komander和Rape，2012）。遍在蛋白化由一系列酶（包括Ub激活酶（E1），Ub结合酶（E2s）和Ub连接酶（E3s））催化。泛素化的体外重建是确定酶之间或E3与蛋白质底物之间特异性的有用测定法（Zhao等人，2012）。在古细菌中，Ubl蛋白SAMP采用Ub折叠，并且与E1样酶UbaA催化的蛋白靶标异肽连接[Maupin-Furlow，（2014）综述]。尽管E1同系物在古细菌中广泛存在，但基于一级序列比较，在大多数古细菌中未预测经典E2或E3酶。我们最近对Haloferax volcanii的研究表明甲硫氨酸亚砜还原酶A（MsrA）是Ubl蛋白质修饰（sampylation）与UbaA一起在体内温和的氧化条件下和< （体外）（fu="">
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