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Date:
2018-05-20
[Abstract] Early mouse lung development, including specification of primordia, patterning of early endoderm and determination of regional progenitor cell fates, is tightly regulated. The ability to culture explanted embryonic lung tissue provides a tractable model to study cellular interactions and paracrine factors that regulate these processes. We provide up-to-date protocols for the establishment of this culture model and its application to investigate hedgehog signaling in the developing lung.
[摘要] 早期鼠肺发育，包括原基的规范，早期内胚层的构图和区域祖细胞命运的确定，受到严格的调控。 培养移植胚胎肺组织的能力提供了一种易处理的模型来研究调节这些过程的细胞相互作用和旁分泌因子。 我们提供最新的协议，以建立这种文化模式及其应用来研究肺部发育中的刺猬信号。
【背景】小鼠肺发育起始于前肠前内胚层的内胚层憩室（E9.5），随后关闭近端气管食管中隔以形成不同的气管和食道管（Minoo和King，1994）。原始内胚层管的随后分支通过E12.5产生平面肺结构，随后正交分支产生成熟肺的三维结构特征（Metzger等人，2008）。在E12.5之前分离的肺遗传的平面结构适合于在空气液体界面进行体外培养（Carraro等人，2010; Del Moral和Warburton， 2010）。胚胎肺通过解剖使用立体显微镜在亮场照明下或通过与谱系追踪和荧光报道分子偶联时的荧光照明进行分离。在这里，我们描述了使用Shh Cre / Rosa mTmG报告小鼠，其允许Cre介导的从约E8.75起在前部前肠内胚层内的膜定位的GFP的激活（Montgomery <等人，2007;高斯等人，2009; Yao等人，2017）。因此，肺内胚层通过红色荧光由绿色荧光和周围组织显现，从而允许清晰识别和显微切割包括肺在内的发育内胚层结构，并在体外培养期间成像。
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