| Human Endothelial Cell Spheroid-based Sprouting Angiogenesis Assay in Collagen
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Angiogenesis, the formation of new blood vessels from pre-existing ones plays an important role during organ development, regeneration and tumor progression. The spheroid-based sprouting assay is a well-established and robust method to study the influence of genetic alterations or pharmacological compounds on capillary-like tube formation of primary cultured endothelial cells. A major advantage of this assay is the possibility to study angiogenesis in a 3D environment. Endothelial cells are cultured as hanging drops to form spheroids. Those spheroids are embedded into a collagen matrix and tube formation is analyzed 24 h later. By analyzing sprout number and sprout length the effects of genetic manipulation or drug treatment on angiogenesis can be investigated.
[摘要] 血管生成，从先前存在的血管形成新血管在器官发育，再生和肿瘤进展中起重要作用。 基于球体的发芽测定法是一种成熟且稳健的方法，用于研究遗传改变或药理学化合物对原代培养的内皮细胞的毛细血管样管形成的影响。 该测定的主要优点是可以在3D环境中研究血管生成。 将内皮细胞培养为悬滴以形成球状体。 将这些球状体嵌入胶原基质中，24小时后分析管形成。 通过分析发芽数和发芽长度，可以研究遗传操作或药物治疗对血管生成的影响。
【背景】血管为器官提供氧气和营养。在不再满足局部需求的情况下，细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）以诱导新血管的形成。新的容器芽由一个由茎细胞牵引的前端细胞组成（Potente和Makinen，2017）。血管生成在生理条件下（例如，肌肉和脂肪组织的生长）以及病理条件（例如，伤口愈合，黄斑变性和肿瘤生长）发生。因此，非常需要破译协调血管生成的基本机制并测试干扰病理性血管生成的化合物。
基于球体的发芽试验由Thomas Korff博士和Hellmut Augustin博士在90年代后期开发（Korff和Augustin，1999），使研究人员能够快速研究药物或基因操作对发芽血管生成的影响。稳健的方式（Heiss et al。，2015）。基于球体的发芽测定的一个重要优点是分析3D环境中的芽形成。这促进内皮细胞之间的细胞 - ...
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| Ectopic Gene Expression in Macrophages Using in vitro Transcribed mRNA
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Macrophages are immune cells that contribute to host defense through various mechanisms including phagocytosis and antigen presentation. Their antimicrobial capacity is subverted by clinically important intracellular pathogens such as Mycobacterium tuberculosis. The study of host-pathogen interactions using these cells is therefore of considerable interest. Such studies often seek to express tagged proteins to characterize their activities, localizations, and protein-protein interactions. Here, we describe a robust method for transient protein expression in macrophages using mRNA lipoplex transfections.
[摘要] 巨噬细胞是通过包括吞噬作用和抗原呈递在内的多种机制促成宿主防御的免疫细胞。 它们的抗菌能力被临床上重要的细胞内病原体诸如结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）所破坏。 因此使用这些细胞进行宿主 - 病原体相互作用的研究具有相当大的意义。 这样的研究通常试图表达标记的蛋白质来表征它们的活性，定位和蛋白质 - 蛋白质相互作用。 在这里，我们描述了使用mRNA脂质复合物转染在巨噬细胞中瞬时蛋白质表达的稳健方法。
【背景】典型的实现蛋白质表达的方法，包括使用阳离子聚合物转染DNA，核转染和病毒转导（Zhang等人，2009）在巨噬细胞中特别困难，因为这些细胞具有对 各种危险信号如胞质DNA。 因此，用于外源基因递送的常规方法导致差的转染效率和细胞死亡。 我们推论，正如最近的报道（Van De Parre等人，2004; McLenachan等人，2004）所述，转染mRNA而不是DNA，将是实现巨噬细胞中蛋白质表达的更好的替代方案 。，2013）。 我们能够实现高转染效率而不损失巨噬细胞活力（Koster等人，2017）。 我们的方法不需要昂贵的设备，可以适应表达外源性和内源性蛋白质。
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